生化实验报告1.docVIP

生物化学实验报告 姓 名： 张雪 学 号： 1120011012 专业年级： 2012级临床医学八年制 组 别： 第二实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 (Title of Experimetn) 氨基酸的薄层分析 实验日期 (Date of Experiment) 2014-04-17 实验地点(Lab No.) 第二实验室 合作者(Partner) 胡云腾 指导老师(Instructor) 王妮莎 总分 (Total Score) FORMTEXT XX 教师签名(Signature) FORMTEXT 李某某 批改日期 (Date) FORMTEXT 2013-06-03 【实验报告第一部分（预习报告内容）： = 1 \* GB3 ①实验原理、 = 2 \* GB3 ②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、 = 3 \* GB3 ③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）： FORMTEXT XX】 = 1 \* GB3 ①实验原理：层析技术是利用化合物中各组分的物理性质的差别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而达到分离的目的的一种技术，在现代分子生物学中广泛应用。 进行层析时有固相层析（以气体为流动相的层析法）和液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领域里常用的方法）两种，本次氨基酸的分离与鉴别所用的薄层分析法是液相分析的一种，薄层层析法一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）。 茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原，此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。 层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。 = 2 \* GB3 ②实验材料：吸附剂：硅胶 粘合剂： 0.5%的羧甲基纤维素钠 氨基酸的异丙醇溶液: 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸 展开-显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液） 分析样品：氨基酸混合液 层析板、尺子、铅笔、烧杯、量筒、喷雾器、吹风机、毛细管、层析缸、药匙、烘烤箱 1、位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距1cm。2、用毛细管分别吸取氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面点样。3、加样后原点扩散直径不超过2mm。4、待点样点干后再重复点一次。用热风吹干或在85℃下烘干，即可显出各层斑点。将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线。1、调浆 称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状。 2、涂布 取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。 3、干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然晾干。 4、活化 70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。点样层析显色制板 = 3 \* GB3 1、位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距1cm。 2、用毛细管分别吸取氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面点样。 3、加样后原点扩散直径不超过2mm。 4、待点样点干后再重复点一次。 用热风吹干或在85℃下烘干，即可显出各层斑点。 将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线。 1、调浆 称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状。 2、涂布 取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。 3、干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然晾干。 4、活化 70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。 点样 层析 显色 制板 注意事项：玻璃板要洗干净，擦干； 重复点样时，必须等第一点样品干后再点第二点； 点样样品量要适中，斑点直径一般为0.2cm； 样点不能浸入到溶液中； 制好的层析板要防止被污染