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生物碱提取方法的研究进展 氨基酸化合物是自然界中常见的含氮有机化合物。它们大多具有复杂的氮环结构、生理活性和碱性。这是许多中药和药物的有效成分。 1 水溶液中的原则 生物碱的溶解性能是生物碱提取的重要依据之一。游离状态的生物碱根据溶解性能可分为亲脂性生物碱和水溶性生物碱两大类。亲脂性生物碱数目较多,绝大多数叔胺碱和仲胺碱都属于这一类。它们易溶于苯、乙醚、氯仿、卤代烷烃等极性较低的有机溶剂,在丙酮、乙醇、甲醇等亲水性有机溶剂中亦有较好的溶解度,而在水中溶解度较小或几乎不溶。水溶性生物碱主要是指季铵型生物碱,数目较少,它们易溶于水、酸水和碱水,在甲醇、乙醇和正丁醇等极性大的有机溶剂亦可溶解,但在低极性有机溶剂中几乎不溶解。 具碱性的生物碱能和酸结合生成盐。生物碱盐一般易溶于水,难溶或不溶于亲脂性有机溶剂,但可溶于甲醇或乙醇。生物碱盐的水溶液加碱至碱性,则生物碱又以游离碱的形式存在。如亲脂性生物碱盐,则加碱后生成的游离碱又可自水溶液中沉淀析出。碱性极弱的生物碱和酸不易生成盐,仍以游离碱的形式存在,或生成的盐不稳定,其酸水液不需碱化,即可用氯仿提出游离碱。 2 氨基酸的提取 传统的生物碱提取方法是建立在生物碱的理化性质,尤其是对于不同溶剂包括酸、碱等的溶解性能的基础上的。一般来说,除少数具有挥发性的生物碱可用水蒸气蒸馏法,具有升华性的生物碱可采用升华法提取外,绝大多数生物碱是利用溶剂提取法进行提取。提取过程一般由生物碱的粗提和纯化两个过程组成。 2.1 化合物的合成 生物碱在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。一些常见溶剂按亲脂性的强弱顺序为:石油醚苯氯仿乙醚乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇水。生物碱大部分是亲脂性化合物,而生物碱盐能够离子化,加大了极性,就会变成亲水化合物。当生物碱和生物碱盐与溶剂溶解性相当时,就会有较大的溶解度。 按溶剂种类,可分为水或酸水提取法、醇类溶剂提取法、亲脂性有机溶剂提取法及其他溶剂提取法。 (1) 原则用碱提取碱 具碱性的生物碱在植物体中多以盐的形式存在,而弱碱性或中性生物碱则以不稳定的盐或游离碱的形式存在。生物碱盐类一般不溶于亲脂性有机溶剂而溶于水或醇。用水作溶剂提取生物碱,植物体中一些亲脂性的弱碱或中性碱提取不完全或不被提出,但如用酸水提取,则使生物碱都以盐的形式被提出。故生物碱提取一般采取酸水作溶剂,较少采用水提取。酸水提取法常用0.5%～1%的乙酸、硫酸、盐酸或酒石酸等为溶剂。 (2) 提取溶剂的选择 游离生物碱及盐类一般都能溶于甲醇和乙醇,因此它们作为生物碱的提取溶剂应用较为普遍。虽然甲醇比乙醇极性大,沸点低,对生物碱盐类的溶解性能比乙醇好,但它对视神经的毒性很大,所以除实验室有时用甲醇为生物碱提取溶剂外,多数用乙醇为溶剂,有时也用稀乙醇(60%～80%)作溶剂。也有采取酸性醇作提取溶剂。醇类溶剂提取液中除含有生物碱及其盐类外,尚含有大量的其他脂溶性杂质,用稀醇提取的还含有一些水溶性杂质,需进一步处理。 (3) 游离碱的提取 大多数游离生物碱都是脂溶性的,因此可以用亲脂性有机溶剂,如氯仿、二氯甲烷或苯等提取。由于生物碱一般以盐的形式存在于植物细胞中,故采用亲脂性有机溶剂提取时,必须先使生物碱盐转变成游离碱,其方法是先将药材粉末用石灰乳、碳酸钠溶液或稀氨水等碱水湿润后再用溶剂提取。亲脂性有机溶剂提取法提出的总生物碱一般只含有亲脂性生物碱,不含水溶性生物碱。这种提取方法得到的总生物碱,杂质较少,易于进一步纯化。 (4) 提取溶剂的选择 除了以上几种传统的溶剂提取方法外,为提高提取效率,根据生物碱的不同性质衍生出一些其他方法。如钟静芬等人用不同类型和浓度的表面活性剂对秦艽生物碱进行提取,结果表明,非离子型表面活性剂的水溶液能增加生物碱的提取率,尤其以0.5%TW80稀醇液的提取率最高,并大于95%乙醇液、水和酸水作溶剂的提取率。又如段光明、宗会研究了不同溶剂系统对马铃薯糖苷生物碱的提取效果,即单溶剂法(甲醇为溶剂)、双溶剂法(体积比为2:1的甲醇与氯仿)和混合溶剂法(体积比为50:30:20:1的四氢呋喃、水、乙腈及冰乙酸),结果表明,混合溶剂提取效果最好,提取率最高,双溶剂次之,单溶剂最低。 另外,还可以将溶剂提取法与其他方法相结合。如正处在探索中的溶剂提取-超声波法,是以超声波辐射压强产生的骚动效应、空化效应和热效应引起机械搅拌,加速扩散溶解的一种新型提取方法。如郭孝武用溶剂提取-超声波法提取益母草总碱,并与热回流法相比较,发现超声波法所得益母草总生物碱的提出率高于热回流法,并且缩短了提取时间。 按具体操作可分为浸渍法、渗漉法、热回流法、连续回流提取法和煎煮法。 (1) 甲基莲心碱的纯化 浸渍法简便,是最常用的方法之一。它是将处理过的药材,用适当的溶剂在常温或温热(60～80℃)的情况下浸渍以溶出其中成分。