生物化学大实验.docVIP

生物化学大实验 一、装柱及标准样品的分子筛层析： 把柱子固定在夹子上，打开下面的盖，用取液器匀速加入介质。保证介质均匀沉淀，且要缓慢加入，防止产生气泡。待介质完全沉降打开柱的上盖，剪一与柱内径大小一致的圆形滤纸片放入柱中，沉淀于介质表面。液体接近界面时加入3ml超纯水，同时在层析杯中加入100ml超纯水，连接泵洗柱15min，同时配制平衡液200mL（20mmol Tris-HCl,pH 8.0; 20mmol NaCl）。待液体接近界面时，在柱中加入3ml平衡液（其余平衡液加到层析杯中），调节流速，控制滴速为3ml/10min（一分钟约6-7滴）。平衡柱过中午。 实验材料：牛血清蛋白、糜蛋白酶 二者比例为2:1 溶于20mmol Tris-HCl，pH 8.0; 20mmol NaCl（教师统一配制）。 缓慢向柱中加入样品（4ml）打开层析柱上下端，使样品靠重力流出。当样品接近界面时在柱中加入3ml 上样缓冲液（即平衡液），连接泵，调T=100 A(0.5A)=0 ， 开启记录仪，同时配制100ml 0.1M Nacl。待两个峰都出来后，把层析杯中的液体换为0.1M Nacl洗柱20min，再用超纯水洗柱30min，封柱，关机。 。 实验二 BAP的诱导表达 在5ml培养基中加入Amp 2.5μl（母液为100mg/ml）和10μl菌液。在摇床上37℃ 130转过夜预培养。