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DMEM细胞培养液的配制及贴壁细胞的传代 一．实验目的 熟练掌握DMEM细胞培养液的配制 熟练掌握贴壁细胞的传代过程以及倒置显微镜的使用 二．实验原理 培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基的种类很多，按其物质状态分为半 固体培养基和液体培养基两类；按其来源分为合成培养基和天然培养基。 (1) 合成培养基：合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。 (2) 天然培养基：使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及多种活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。常见使用为5-20%。 根据细胞生长的恃点，传代方法有3种 1、 悬浮生长细胞传代 1）离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。 2）直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 2、 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞） 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 3、 贴壁