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热毒清胶囊质量标准的研究 热毒清胶囊是由已故的建筑、南板蓝根、婆罗洲、蒲公英和甘草组成的复方制剂。具有清热解毒、肿胀和结论的功能。用于热毒内盛所致的腮腺炎、扁桃腺炎、喉头炎、上呼吸道感染等症。为了有效地控制其药品的质量标准,进行了定性及定量研究,采用薄层色谱法对方中的重楼 、南板蓝根和冰片进行了鉴别,采用HPLC法对重楼中重楼皂苷I(C51H82O20)进行了含量测定。 1 设备 1.1 entvwd复配 1100 HPLC高效液相色谱仪,Agilent VWD检测器,HP二维化学工作站,Agilent 8453紫外可见分光光度计,德国赛多利斯BP211D十万之一电子天平。 1.2 试剂 甲醇为色谱纯,水为二重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。 1.3 检定所、热毒清胶囊 重楼皂苷I对照品购自中国药品生物制品检定所(批号111591-200402,供含量测定用),热毒清胶囊10批成品(广西万寿堂药业有限公司提供)。 2 方法和结果 2.1 性别标记 2.1.1 标准品色谱的制备 取本品粉末2 g,加氯仿10 ml,浸渍20 min,并时时振摇,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加氯仿0.5 ml使溶解,作为供试品溶液。另取靛玉红对照品,加氯仿制成每毫升含0.05 mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5～10 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开,取出晾干。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。结果见图1。 2.1.2 对照品色谱的制备 取本品粉末2 g,加乙醚10 ml,浸渍20 min,滤过,滤液挥干,残渣加氯仿0.5 ml使溶解,作为供试品溶液。另取冰片对照品,加氯仿制成每毫升含2 mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5～10 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。结果见图2。 2.1.3 标准品色谱的制备 取本品粉末2 g,加乙醚10 ml,浸渍20 min,取乙醚浸渍过的残渣挥干,加甲醇10 ml,超声处理30 min,滤过,滤液挥干,残渣加水4 ml使溶解,移入分液漏斗中,加水饱和的正丁醇8 ml,轻轻振摇3 min,静置30 min,取上层液加水4 ml,轻轻振摇3 min,静置30 min,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇4 ml使溶解,作为供试品溶液。另取重楼对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5～1 0 μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘烤数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。结果见图3。 2.2 测量的测量 2.2.1 毒内盛所致的症 热毒清胶囊以重楼、南板蓝根、冰片、蒲公英、甘草等药材经加工制成的中药制剂,具有清热解毒,消肿散结之功,用于热毒内盛所致的腮腺炎、扁桃腺炎、喉头炎、上呼吸道感染等症。重楼为方中的君药,具有清热解毒,消肿止痛,凉肝定惊之功,其所含有效成分重楼皂苷I(C51H82O20)和重楼皂苷II(C44H70O16),因此我们选择方中君药重楼进行含量测定研究,为控制该产品的质量提供保障,以重楼皂I为对照品用高效液相色谱法测定本品中重楼皂苷I的含量。 2.2.2 在铬条件下和系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂;乙腈-水(42∶58)为流动相;检测波长为210 nm。理论板数按重楼皂苷I峰计算应不低于4 000。 2.2.3 重楼皂苷i的合成 精密称取在40℃减压干燥2 h的重楼皂苷I对照品19.80 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每毫升中含重楼皂苷Ⅰ为0.792 mg)。 2.2.4 超声减失法 取本品1 g,精密称定,置50 ml具塞锥形瓶中,精密加入乙醇溶液25 ml,密塞,摇匀,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称定重量,用乙醇溶液补足减失的重量,摇匀,取上清液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。 2.2.5 含量测定的研究 2.2.5. 标准曲线的绘制 分别精密吸取上述对照品溶液0.5,1,2.5,4,5 ml,置5 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。按“2.2.2”项下的色谱条件分别进样10μl测定。以重楼皂苷I对照品进样量(mg)为横坐标(X),峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线,见图4。回归方程y= 1.528 5×103X