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分子伴侣GroELGroES介导重组蛋白可容表达及折叠与组装初步研究的中期报告
本研究利用分子伴侣GroEL/GroES介导重组蛋白可容表达、折叠与组装的方法,对目标蛋白进行了初步研究。首先,通过PCR扩增目标蛋白基因,并将其连接到表达载体上。然后,将载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,使用IPTG诱导表达目标蛋白。通过SDS和Western blotting检测表达的目标蛋白的分子量和抗原性。
在蛋白表达的基础上,我们进一步考虑如何提高目标蛋白的可溶性和折叠效率。我们选择了GroEL/GroES分子伴侣辅助折叠的方法,将目标蛋白和GroEL/GroES一起在LB培养基中表达,将表达产物经过不同的处理,包括不同浓度的GroEL/GroES、不同温度和不同时间等。通过Western blotting检测目标蛋白的折叠情况,并使用光散射折射仪和圆二色谱对目标蛋白进行分析,表明GroEL/GroES介导的重组蛋白折叠状态得到了显著改善。
最后,我们进一步考虑将重组蛋白进行组装成多聚体结构。我们采用不同条件的重组蛋白之间的搭配,在特定的条件下进行组装,通过动态光散射仪和其他方法对组装成果进行分析。
总的来说,本研究通过利用GroEL/GroES分子伴侣介导的重组蛋白折叠和组装方法,成功地提高了目标蛋白的可溶性和折叠效率,并初步探讨了重组蛋白的组装过程。这为进一步的蛋白质工程研究提供了一定的基础。
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