喜炎平注射液对lps致急性肺损伤大鼠肺管细胞因子含量的影响.docxVIP

喜炎平注射液对lps致急性肺损伤大鼠肺管细胞因子含量的影响 西炎平注射液的成分是一种含有睡莲的水生透皮屑。该颗粒是从中药中提取的总精华。对急性上呼吸道感染、儿童性肺炎和儿童支气管炎肺炎进行临床治疗非常有效。余洋等对喜炎平注射液进行了体内抗菌试验、解热试验、抗炎试验及止咳试验研究。结果表明,喜炎平对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌感染小鼠有明显的保护作用,有明显的解热、抗炎作用,对枸橼酸致豚鼠咳嗽次数有明显抑制作用,并为临床用药提供了信息。王潞等检测了喜炎平注射液的体外细胞毒性以及对多种炎性细胞因子如NO、TNF-α、及IL-6的抑制作用,表明喜炎平注射液能显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞分泌NO、IL-6和TNF-α等炎性因子,且喜炎平体外对前炎症因子的抑制作用强于穿琥宁注射液,推测喜炎平注射液可能是通过调节巨噬细胞产生NO、IL-6和TNF-α等炎性细胞因子从而发挥抗炎作用。本研究通过检测细菌内毒素(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠发病过程中给药喜炎平注射液治疗前后多种细胞因子的变化,以探讨喜炎平注射液治疗内毒素性肺损伤的机制。 1 材料和方法 1.1 药品、试剂与仪器 LPS(Escherichia coli 0111:B4)购自美国Sigma公司,TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-6和IL-10等试剂盒均为RB公司产品,喜炎平注射液购自江西青峰药业有限公司(批。全自动多功能酶标仪:MULTISKAN MK3,Thermo,USA;电热恒温培养箱:DH4000A,天津泰斯特;漩涡振荡器(MINI shaker):MH-1,kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER。 1.2 尾静脉给药组和给药剂量 健康雄性SD大鼠,北京维通利华实验动物技术有限公司提供,体重150g±10g,适应性饲养3d,实验前禁食过夜,自由饮水。随机分成7组,正常对照组(NS组,n=9):尾静脉注射生理盐水0.2ml,注射后30min尾静脉注射生理盐水8ml·kg-1。模型组(LPS组,n=27),尾静脉注射LPS 2mg·kg-1,注射30min后尾静脉注射生理盐水8 ml·kg-1。给药组(XYP组,n=27):尾静脉注射LPS 2mg·kg-1,注射后30min尾静脉注射喜炎平注射液200 mg·kg-1(喜炎平注射液规格50mg·2ml-1,给药量8 ml·kg-1)。NS组于LPS注射2h后取材,LPS组与XYP组分别于LPS注射2h、4h、6h后取材,每组9只。 1.3 灌洗全肺组 麻醉后固定大鼠,暴露气管,进行插管,以1.5 ml生理盐水灌洗全肺,收集灌洗液,重复3次。将BALF离心(3500 rpm,离心10 min)收集上清液,置-80℃冰箱冻存待测。 1.4 测量 采用ELISA法,各细胞因子严格按照试剂盒操作说明书操作。 1.5 统计学处理方法 以均数±标准差表示。采用SPSS 16.0统计学软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),各组间两两比较采用LSD法,以P0.05为差异具有统计学意义。 2 各组大鼠barf中il-1、il-4、il-4含量的比较 表1显示,与NS组相比,2 h时LPS组大鼠BALF中IL-1β,TNF-α显著升高(P0.05)并达到高峰,而后逐渐下降。与同时间点LPS组相比,2h时XYP组大鼠BALF中IL-1β含量显著性降低,4h、6 h时XYP组逐渐降低至正常水平,各时间点TNF-α含量均降低,但较LPS组无显著性差异。 与NS组相比,2 h、4h时LPS组大鼠BALF中IL-6、IL-8逐渐升高,6h时达到高点(P0.01)。6h时XYP组大鼠BALF中IL-6含量较LPS组显著性降低。 与NS组相比,LPS组大鼠BALF中IL-10、IL-4含量显著升高,2h即达高峰(P0.05);2h时XYP组较LPS组含量下降,其他时间点无显著性差异。 3 喜炎平注射液对小鼠肺损伤中tnf-和il-1的激活作用 内毒素脂多糖一旦侵入机体可促使巨噬细胞、内皮细胞、中性粒细胞等释放大量的细胞因子,损害组织细胞。LPS攻击肺部时,可以造成肺泡毛细血管膜的损害,导致多形核中性粒细胞的附着、激活与积压,同时影响气体交换并最终导致呼吸衰竭。同时,LPS可以使机体产生大量炎性介质,目前认为参与急性肺损伤(ALI)的炎症因子超过40种,其中最重要的也是研究最多的是促炎因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等)和抗炎症介质(IL-4、IL-10等),本研究对大鼠BALF中上述细胞因子进行测定。 本研究发现,尾静脉注射LPS后,大鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-4、IL-10含量均明显升高,可以认为