人轮状病毒的凝胶层析纯化方法及其病毒灭活后的免疫分析.docxVIP

人轮状病毒的凝胶层析纯化方法及其病毒灭活后的免疫分析 rv是引起婴儿病毒性腹泻的主要原因。针对RV感染，目前尚无特异性的治疗方法，疫苗接种为最经济有效的预防方法。目前使用的RV减毒活疫苗在预防RV感染中虽发挥了作用，但也存在诱发肠套叠、毒力返祖以及外源因子污染等问题。因此，开发灭活RV疫苗具有重要意义。 研制灭活RV疫苗的关键是获得高纯度的RV，本文采用Q Sepharose Fast Flow(QFF）和Sepharose4 Fast Flow(4FF）两种不同的凝胶填料对Vero细胞制备的人轮状病毒ZTR-5株（PG3）进行层析纯化，并对纯化产物进行鉴定，为RV灭活疫苗纯化工艺的建立奠定基础。 1. 材料和方法 1.1 腹泻病患儿腹泻麻黄标本中分离 人轮状病毒ZTR-5株（PG3）由云南省昭通市医院儿科腹泻病患儿腹泻排泄物标本中分离获得；猴肾细胞MA104（第27代）和Vero细胞（第148代）由中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室保存。 1.2 实验动物：制备 SPF级BALB/c小鼠，雌性，6周龄，体重为18～20 g，购自昆明医学院实验动物中心，实验动物健康证号为：0021975，实验动物许可证号为：SCXKC（滇）2011-0004。经ELISA检测血清RV抗体阴性，且无其他病原体感染的小鼠用于实验。 1.3 人轮状病毒抗血清 A群轮状病毒诊断试剂盒（胶体金）为北