野生型和突变型MBL的体外表达及其特性研究的中期报告.docxVIP

野生型和突变型MBL的体外表达及其特性研究的中期报告 本研究旨在通过体外表达和比较野生型和突变型Mannose Binding Lectin（MBL）的特性，进一步探讨MBL突变与其功能的关系。 首先，通过PCR扩增野生型MBL基因和两种突变型MBL基因，分别插入到宿主细胞表达载体pET28a中。转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞，进行蛋白表达和纯化。经SDS和Western blotting检测，发现野生型MBL和突变型MBL均在pET28a表达系统中有良好的表达和纯化效果。 接着，采用ELISA方法比较了野生型MBL和两种突变型MBL对不同浓度的Man-Bovine Serum Albumin（BSA）的结合能力。结果显示，两种突变型MBL的结合能力均低于野生型MBL。 最后，通过凝集抑制实验比较野生型MBL和两种突变型MBL的凝集抑制能力。结果表明，野生型MBL和突变型MBL均对Escherichia coli O111:B4的凝集抑制能力较强；而对于Salmonella typhi的凝集抑制能力，突变型MBL明显低于野生型MBL。 综上所述，本研究成功地体外表达和纯化了野生型MBL和突变型MBL，并对其在结合和凝集抑制能力方面的差异进行了初步探究。下一步研究将进一步深入探讨MBL突变对其功能的影响及其在疾病发生机理中的作用。