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中国人p53基因内含子7序列多态性位点的测定 p53基因是人类高度保守的基因。在人染色体的17p1.3中，有11个标记和10个包含子。国内外关于p53基因突变与肿瘤的关系研究较多,我们对肿瘤标本p53基因外显子7和8序列进行分析时,发现第7内含子上、距外显子7最后1个碱基对73 bp处有1个C和T的多态,93 bp处有1个T和G的多态,与肿瘤无关。进一步对105名正常人进行序列分析,证实在正常人p53基因内含子7有两个多态位点,且前一个多态位点处有1个ApaⅠ酶切位点的变化,这在亲缘关系和法医鉴定等方面有重要价值。 1 材料和方法 1.1 样品 105名正常人,无亲缘关系,抽0.5 ml静脉血,用EDTA钠抗疑。 1.2 试剂及仪器 310型DNA测序仪、2400型热循环仪,四色荧光末端标记测序试剂盒、序列胶、分析缓冲液、模板抑制剂等由美国Perkin-Elmer公司产,TaqDNA聚合酶、扩增缓冲液、dNTP等由加拿大Sangon公司产,电泳级琼脂糖由中国科学院上海药物所产,引物由中国科学院上海生工公司产,其他试剂采用国产分析纯试剂配制而成。 1.3 基因组dna提取与聚合酶基因扩增 引物序列分别为引物1:5′-TGTTGT-CTCCTAGGTTGGCTCTGACTA-3′;引物2:5′-GT-CCTGCTTGCTTACCTCGCTTAGTGC-3′。扩增长度包括外显子7、8和