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PAGE 1 PAGE 1 《生物工业分析》课件ppt第六章课程知识 1、生物工业分析生物工业分析第六章色层分析法第六章色层分析法第一节概述第一节概述 其次节柱层析其次节柱层析 第三节纸上层析第三节纸上层析 第四节薄层层析第四节薄层层析 第五节凝胶层析第五节凝胶层析 色层分析法色层分析法 第一节第一节概述概述 色层分析法简称层析法，也称色谱法、层离法等。按两相所处的状态分类：用液体作为流淌相的称为“液相色谱”，用气体作为流淌相的称为“气相色谱”。考虑到固定相的物态，液相色谱又分为“液液色谱”和“液固色谱”，气相色谱又分为“气液色谱”和“气固色谱”。按固定相使用形式分类：可分为柱层析、纸层析、薄层层析。按分别过程的物理化学性质分类：可分为安排层析、吸附层析、离子沟通层 2、析、凝胶层析、亲和层析等。按洗脱方式分类：可分为洗脱法、迎头法、置换法。色层分析法色层分析法 其次节柱层析其次节柱层析一、吸附柱层析1原理吸附层析是利用吸附剂对不同物质吸附力的差别而达到分别的方法。图6-1二元混合物的柱层析图 色层分析法色层分析法 吸附柱层析的过程可简要说明如下：装置如图6-1，用一根玻璃管，底部放些棉花或玻璃纤维，管中填入吸附剂（如氧化铝的粉末），这样就形成了一个吸附柱。然后在顶部加入待分别的样品溶液，设样品内含有两种组分A和B，则两者都被吸附剂留在柱的上端形成一个色带。图6-1，图中的虚线是溶液中溶剂前沿到达的地方。样品溶液全部流入吸附柱中后，接着就加入纯溶剂冲洗，管内就  3、连续不断地发生解吸、吸附、再解吸、再吸附的过程。例如被吸附的A组分被溶剂所解吸而随溶剂向下移动时，又遇到新的吸附剂颗粒，重新把A自溶液中提出而被吸附，当连续流下的新溶剂再次把A解吸向下移动，然后再被吸附，这样经过一段时间以后，A就会向下移动至肯定距离。同理B也向下移动，由于溶剂及吸附剂两者对A与B的角吸力与吸附力不同，A与B所移动的距离也就不同。吸附力较弱的与解吸力较强的组分（如A），移动距离也就大些，经过适当时间以后，A和B就可以平安分开，形成两个区带，每一区带内是一种纯物质。假如A与B有颜色，就可清晰地看到色带，如图6-1。加入的溶剂称为“洗脱剂”，冲洗过程称为“洗脱”或“绽开”，管下流出  4、的液体称为“流出液”或“洗脱液”。色层分析法色层分析法 2流出曲线图6-2不同洗脱方式的流出曲线 色层分析法色层分析法 洗脱法流出曲线假如洗脱剂采纳纯溶剂，并连续不断地洗脱，最初流出的为纯溶剂，尔后是吸附力较弱的组分A，最终为吸附力较强的组分B，得到的流出曲线见图6-2。洗脱法优点是分别效能高，能得到纯组分溶液，适用于多组分混合物的分别，它是目前层析法中最常用的方法。迎头法流出曲线假如洗脱剂为原试样溶液，则最初流出的为纯溶剂，当流过肯定体积的试样溶液后，吸附力较弱的组分A在吸附柱中被饱和，组分A就开头流出，其浓度要比原试样溶液中组分A的浓度为高。紧接着吸附力较强的组分B在吸附柱中被饱和，组分B  5、也开头流出，此时收集的流出液组成与原试样溶液完全相同，见图6-2。迎头法只能得到较纯的组分A，它不是一个抱负的分别方法，仅用作混合物的分析讨论之用。色层分析法色层分析法 置换法流出曲线假如洗脱剂是一种溶液，内含有吸附力更强的组分，称为“置换剂”，同样道理，得到的流出曲线为图6-2。置换法能达到组分A与组分B分别的目的，但临接部分则相互混杂。3吸附剂能作为吸附剂的，需满意下列要求：吸附剂要具有合适的吸附力，表面积大，通常呈粉末状或纤维状。吸附剂颗粒匀称，否则不能得到均一的色层谱。吸附剂与吸附物质的吸附、解吸应是可逆的。吸附剂不应含有杂质，否则需经预处理后使用，通常可用有机溶剂浸泡以除去杂质。色层  6、分析法色层分析法 用作吸附剂的材料许多，可分为无机吸附剂与有机吸附剂，常用的无机吸附剂有氧化铝、碳酸钙、氧化钙、氧化镁、氧化锌、磷酸氢钙、硅酸、活性炭等。有机附吸附剂有蔗糖、乳糖、淀粉、菊根粉、纤维素等。按其吸附力的大小分为弱、中、强三类，见表6-1。表6-1吸附剂按吸附力分类 色层分析法色层分析法 4洗脱剂洗脱剂的选择一般需要考虑以下几个方面：首先需考虑样品在溶剂中溶解度。溶剂一般需无水溶剂，而且不与水互溶。溶剂的沸点要相宜，一般讲溶剂沸点以4080为宜。溶剂纯度要高，溶剂中即使是微量杂质的存在，有时也可明显地转变吸