蛋白质及还原糖的检验.docVIP

蛋白质的检验 双缩脲反应 双缩脲试剂（biuret reagent）是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成. 　　双缩脲试剂A的成分是 氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水 溶液； 　　双缩脲试剂B的成分是 硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。 　　双缩脲试剂可以验证 蛋白质的存在。 　　具体方法是： 　　先将双缩脲试剂A加入组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，振荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生 紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的 络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 　　双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。 　　双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。 在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液，再加入氢氧化钠[NaOH]溶液，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜[ Cu(OH)2]沉淀，导致现象不清