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外周血淋巴细胞的初步纯化 从人类血清中分离单个核细胞（pb农村土地），并对t淋巴细胞进行纯化和培养。常用的方法有尼毛吸附法、花环形成分离法和免疫吸附法。在这3种方法中,前2者所得到的T淋巴细胞纯度低且含有NK细胞,后者所得到的T淋巴细胞纯度高但费用昂贵。作者从郭爱林等的研究中得到启发,选用方法简单、费用低的白细胞介素-2(IL-2)维持下,利用细胞培养淘汰法,根据细胞分化和死亡时间的不同而筛选纯化出T淋巴细胞。 1 材料和方法 1.1 tbd生物技术发展中心 人食管癌Eca-109细胞系(本室保存)。主要试剂:RPMI 1640(Gibco公司),胎牛血清(天津市TBD生物技术发展中心),重组人白细胞介素-2(rhIL-2,Sigma公司);荧光标记抗体:FITC-IgG1、PE-IgG2、FITC-CD3、PE-CD4、PE-CD8、PE-CD19、PE-CD16+56(Becton Dickimso公司);FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson公司)。 1.2 细胞仪检测细胞t、nk、b细胞及t细胞亚群所占细胞总数的检测 抽取健康志愿者外周血50 ml,使用密度梯度离心法收获PBMCs,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次,以RPMI 1640培养液37 ℃体积分数为5%CO2条件下培养2 h后,换培养瓶(去除巨噬细胞),以含10 IU/ml rhIL-2 的