斜纹夜蛾SL-1细胞色素C基因的克隆及其原核表达的中期报告.docxVIP

斜纹夜蛾SL-1细胞色素C基因的克隆及其原核表达的中期报告 首先，我们成功地克隆了斜纹夜蛾SL-1细胞色素C基因。该基因的全长为261 bp，包含一个启动子序列、一个起始密码子和一个终止密码子。我们使用PCR技术将该基因从斜纹夜蛾SL-1细胞中扩增，并将其插入到pET-28a(+)载体中，得到重组质粒pET28a(+)-Cytc。 其次，我们利用大肠杆菌BL21(DE3)质粒转化技术，将重组质粒转化到BL21(DE3)菌株中，并进行原核表达实验。将菌株在含有IPTG诱导剂的LB培养基中进行培养，获得了高表达的色素C蛋白。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法观察了其表达水平，发现菌株在24小时之后已经开始高效表达色素C蛋白。 最后，我们对原核表达的色素C蛋白进行了初步的纯化和鉴定。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化，得到了较纯的目的蛋白。利用Western blotting技术证实了目的蛋白的特异性。同时，我们对纯化后的色素C蛋白进行了紫外吸收光谱测定，并观察到了其典型的吸收峰。这些结果表明我们成功地克隆了斜纹夜蛾SL-1细胞色素C基因，并实现了其在大肠杆菌中的原核表达。未来的研究将进一步探究其功能和应用。