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三维成球培养优化间充质干细胞的研究进展 摘要 间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞，其在组织工程、再生医学及基础医疗研究等领域中有着广阔应用潜力。但是，在进行体外培养时，传统的二维培养系统存在一系列问题，例如细胞形态学改变、细胞分化速率降低等。为此，研究人员开始将三维培养系统引入到间充质干细胞培养中，以期能够更好地模拟体内环境，更好地维持细胞的状态和功能。本文综述了三维成球培养优化间充质干细胞的研究进展，包 括三维培养系统的构建、成球培养的技术细节和培养条件的优化等方面。同时，我们也讨论了三维成球培养在间充质干细胞应用中的前景。 关键词：间充质干细胞；三维成球培养；构建；优化；应用 引言 间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是一类成年人体内存在的多向分化潜能的细胞，其具有致密的、纤维状的形态、自我更新能力和可以向不同细胞系分化的潜能。近年来，MSCs 在组织工程、再生医学、基础医学研究等领域中的应用越来越广泛。MSCs 可以通过各种途径获得，例如从骨髓、皮下等成年人体内的不同部位进行分离和培养。然而，传统的二维培养系统存在着某些问题，例如细胞形态学改变、细胞分化速率降低等。为此，研究人员开始将三维培养系统引入到间充质干细胞培养中，以期能够更好地模拟体内环境，更好地维持细胞的状态和功能。 三维成球培养的构建 三维成球培养是一种特殊的三维培养方式，与传统的三维培养不同，其中间充质干细胞被包埋在小型球体中，这些球体有不同的大小和形状，可以根据实验要求进行设计。同时，三维成球培养的构建方式也有所不 同，主要分为两种：平板上成球法和悬浮液内成球法。 平板上成球法 该方法将细胞悬浮液均匀地滴在培养皿内，再将其离心，使细胞与培养基中的胶原蛋白、聚乙二醇等材料混合，然后将培养皿固化到平板 上进行培养。这种方法制备的三维成球培养系统可以自由调节细胞数量、球体大小和形态，同时细胞与基质交互作用强，细胞于多个单元直接接 触，有利于细胞间的交流和细胞信号反应机制的研究。 悬浮液内成球法 该方法需要将 MSCs 转移到中等量的培养基中（一般为 200 mL），并在培养基中加入 Na-alginate 以形成细胞-材料混合物。接下来，在室温下将混合物小滴滴入 Ca2+离子所在的盐溶液中。Ca2+离子会与 Na- alginate 反应，产生弱胶半固体凝胶的丝状结构。然后，把结构化的丝状球囊移到新的培养基中，即可开始三维成球培养的实验。 成球培养的技术细节和优化条件 培养时间 成球培养系统中，MSCs 的增殖、分化和代谢都受到培养时间的影响，因此合理的“时间窗口”对于培养系统的建立和优化来说十分关键。实 验中，研究人员多采用 3–5 天的培养时间，以获得较好的细胞质量和生物学特征表现。 培养基 不同培养基对 MSCs 的分化和增殖具有重要影响，合适的培养基可以增强 MSCs 分化及细胞增殖的能力。硬度系数、成分及补充物的种类和浓度等都对培养基的效果有很大的关键性。例如加入适量的 CNP 可提高球体形成和纳米磁铁的内化，进而促进 MSCs 的诱导分化等。 细胞密度 细胞密度直接影响球体的生长和形成。因此，在成球培养中，细胞密度需要严格控制。实验常用的 MSCs 密度为 3×105~5×105 cell/mL，用以维持球体的稳定性和生物学特征表现。 材料 成球培养需要材料的支撑。在有些研究中，研究人员使用了不同材料的支持体，如琼脂和支架等。作为留下形态的掌管因素，材料能够影响成分的同步性、细胞生长的连通性和实现分化的可控性，因而选择材料对于三维成球的管理至关重要。 三维成球培养的应用前景 三维成球培养已广泛应用于间充质干细胞的体外培养，因其具有较好的仿真环境和形态结构，可模拟 MSCs 在体内的影响，为以后的研究提供了提高。同时，三维成球培养存在缺点，如技术复杂、成本高昂等， 这些问题也亟需研究人员进一步研究和解决。三维成球培养与生物工程、再生医学、基础医学等领域之间的交叉应用将更为广泛，且未来有望成 为间充质干细胞工程的重要方向。 结论 三维成球培养优化间充质干细胞的研究正逐渐成为 MSCs 培养研究 中重要的一环。通过控制成球培养的构建、技术细节和优化条件等方法，可以提高 MSCs 的质量和功能，为生物工程、再生医学及基础医疗研究等 领域提供了有广阔的应用前景的新方向。