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抗肿瘤药物筛选 一 细胞筛选 抗肿瘤药物筛选 2 筛选方法 1.四氮唑蓝(MTT)还原法 原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干 水的蓝紫色产物(formazan)，并沉淀在细胞中， 而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能 溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深 浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测 定OD值 抗肿瘤药物筛选 3 应用： 用于一些生物活性因子的活性检测、大 规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿 瘤放射敏感性测定等。 特点： 灵敏度高、经济。 缺点：产物不溶于水，需被溶解后才能检测。 抗肿瘤药物筛选 4 步骤： (1)制备单细胞悬液； (2)对细胞进行计数，计数后接种于96孔板，一般每孔细胞数 为5000个(可先做细胞倍增试验确定每孔中最佳细胞数)； (3)将培养板放入CO2培养箱，过夜培养； (4) 24h后更换培养基，并在每孔细胞中加入不同浓度药物， 继续培养； (5) 24或48h以后，加入MTT溶液，再培养3-6h,停止培养，弃 取培养基,加入DMSO，每孔150ul，轻微震荡混匀； (6)把96孔板