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鼠孤束核的神经反应机制 鼓索神经纤维控制着舌头前部左右两侧的感知受体，接收到的感知信号通过同一侧的绝缘芯传输。尽管舌体前部对于味觉感受是必不可少的, 但是据临床上观察, 单侧鼓索神经损伤的患者通常没有觉察味觉发生变化。本研究运用电生理学的方法刺激仓鼠对侧鼓索神经, 观察孤束核味觉神经元的反应, 建立对侧舌体补偿味觉信号传递的啮齿动物模型, 为味觉神经传导的后续研究打下基础。 数据和方法 1. 立体定位仪n-b 实验选用29只体重在131g～182g的成年雄性叙利亚黄金仓鼠, 每只均用氨基甲酸酯 (1.7g/kg iP) 做深度麻醉, 在实验过程中根据需要做附加麻醉 (原始浓度的10%) , 以维持麻醉状态。为了接近鼓索神经, 将仓鼠用无损伤头套固定在立体定位仪上 (Narishige SR-6N型) 。仓鼠头部向实验者倾斜至显露外耳道, 扩大外耳道后, 用钳子穿透鼓膜, 至此可以看到行走于锤骨后的鼓索神经, 去掉锤骨, 将电极搭在鼓索神经上并用齿科粘接剂将其固定耳道旁的颅骨上。沿仓鼠后部头骨中线做一矢状切口, 去掉枕骨大孔背侧的一部分枕骨以及覆盖小脑的部分硬脑膜, 沿此直接进入孤束核和旁核, 整个过程中用电热垫将仓鼠的体温维持在37.1℃。 2. 神经电生理检测 实验中使用三种电极:用于记录孤束核反应的玻璃微管, 用于定位味觉区域并注射化学药物到对侧孤束核或旁核的记录/注射微管以及用于刺激对侧鼓索神经的钩状平行双电极。具体的电生理检测步骤:①分离孤束核味觉神经元并记录它们对四种基本味道的反应;②刺激对侧鼓索神经并记录孤束核神经活力的变化;③在一组孤束核神经元对对侧鼓索刺激产生应答后, 注射利多卡因到对侧孤束核或旁核, 然后重复过程;④注射利多卡因的前后分别记录孤束核味觉神经元对四种味道刺激的反应, 并记录注射生理盐水后孤束核对四种味道刺激的反应。利多卡因和生理盐水的注射间隔60min～120min。 3. 介绍与分析过程 用装满蓝色染料的单筒玻璃微管 (尖端直径1～2μm, 电阻5～7MΩ) 记录从对侧孤束核到鼓索刺激侧的潜在单股动作电位。潜在的动作电位被一台频率设定在15～5000Hz的鉴别器放大并显示在示波器上。一台笔记本电脑通过power1401接口板和SPIKE软件 (英国剑桥大学设计) 对味觉刺激信息和在线数据进行分析。作用在舌体前部的化学刺激包括浓度在32mM的氯化钠, 32mM的蔗糖, 32mM的盐酸奎宁及3.2mM的柠檬酸, 所有这些味道刺激溶液均从一套重力引流系统释放, 该系统由一个电脑控制的连接有蒸馏水灌注装置的双程螺线管操作阀以及装有味道刺激溶液的漏斗组成。整个系统执行的是一套序贯刺激, 计算机同步获得数据。具体的流程是:先注入蒸馏水10S, 然后注入10S的味道溶液刺激, 再注入10S蒸馏水冲洗 (流速2ml/S) 。整个流程完成后, 舌体要用蒸馏水冲洗 (50ml) , 两组流程的间隔至少要2分钟以减少误差。 4. 孤束核神经元的检测 从孤立的刺激电极 (Grass 88, Grass Instrument) 发出矩形脉冲 (0.5ms, 0.15mA, 1/3Hz) 到鼓索神经内, 以检测孤束核神经元的反应是否是由鼓索神经刺激引起的。根据鼓索上电极受到50～200脉冲刺激下孤束核神经元的反应数据绘制1ms标准的时间直方图。为确定从对侧鼓索到孤束核味觉反应神经元的神经通路是否是通过旁核传递的, 实验涉及到孤束核和旁核的利多卡因微注射。实验中在一个孤束核或旁核的神经元被隔离后, 玻璃集液管 (内含1%的利多卡因和生理盐水各0.5μl) 的尖端就会向所记录的孤束核或旁核神经元推进1mm。在确定孤束核神经元被来自对侧鼓索的刺激激活后, 一份剂量为0.5μl的利多卡因或生理盐水会注射到对侧孤束核或旁核内 (即鼓索神经刺激的同侧) , 随后根据鼓索上电极受到50～200脉冲刺激下获得的反应数据绘制时间直方图。 5. 实验数据的时间直方图 应用SPIKE软件 (英国剑桥大学设计) 对味觉刺激信息和在线数据进行分析, 绘制所得实验数据的时间直方图。SPSS11.0对统计数据进行χ2检验。 孤束神经核-5活性神经元的合成 1.组织学检查:所有29只仓鼠脑组织的孤束核区域都做了病理检查, 一个用染料标记的典型的孤束核如图1所示, 在这张仓鼠脑干的冠状面切片图上, 箭头指向的位置是耳蜗背侧最先出现并记录的孤束核神经元细胞。这个位置的孤束核神经元可以优先从面神经接收味觉信息。 2.仓鼠孤束核味觉神经元的反应特点:从仓鼠孤束核分离出来的总量为95的味觉神经元在四种基本味道刺激下的反应如下:鼓索神经刺激下有反应的孤束核神经元46个, 无反应的孤束核神经元49个, 95个孤束核神经元都测试了在四种基本味道刺激下的反应, 其中有