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响应面法优化重组枯草芽孢杆菌发酵生产青霉素G酰化酶的中期报告 引言 青霉素是一种广泛应用于临床上的抗生素，青霉素G酰化酶是一种重要的催化青霉素合成的酶。目前，重组干草芽孢杆菌已成为大规模生产青霉素G酰化酶的常用菌株。然而，菌体产量受到许多因素的限制。因此，需要运用响应面法对重组干草芽孢杆菌产生青霉素G酰化酶的条件进行优化，以提高其产量。 方法 首先，通过响应面法优化青霉素G酰化酶的最适产量条件。其中，以培养基pH、温度和转速为三个因素，以青霉素G酰化酶酶活为响应值，运用Box-Behnken试验设计生成15个个体实验条件，采用多元二次方程拟合响应面并进行验证。其次，通过正交试验确定培养基添加剂对青霉素G酰化酶产量的影响。最后，通过单因素试验确定最佳的静态发酵条件。 结果 响应面分析显示，青霉素G酰化酶的最适产量条件为pH 7.0，温度32 ℃，转速220 r/min。添加剂优化结果表明，添加氨基酸、酵母提取物和卵磷脂能够显著提高青霉素G酰化酶的产量。最终确定的最佳静态发酵条件为发酵时间36h，温度35℃，pH 7.2。 结论 利用响应面法，优化了重组干草芽孢杆菌的生产条件，成功提高了青霉素G酰化酶的产量，为青霉素的大规模生产提供了一定的基础。 关键词 重组干草芽孢杆菌；青霉素G酰化酶；响应面法；正交试验；静态发酵。