高效液相色谱法—高效液相色谱法应用（仪器分析课件）.pptx

Contents;高压液相色谱法 一、头孢拉定的定量分析 依据CP2015进行主成分的含量测定。 二、认识常用的定性定量方法 1、定性分析 标准对照法定性 2、定量分析 标准曲线法（外标法）; 未知组分浓度=样品响应值÷f;直接比较法 或 ：标准溶液的质量分数 ：样品溶液的质量分数 ;三、HPLC法测定饮料中咖啡因含量 标准工作曲线法—外标法 四、头孢拉定定量分析 方法来源：CP2000 单点校正法;定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。 ;常用定量分析法 面积归一化法 主成分自身对照法 内标法 外标法;面积归一化法 测定供试品中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。 计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。;面积归一化法 但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外可为该品种项下主成分保留时间的倍数。;主成分自身对照法 当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用该法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。;主成分自身对照法 然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。;内标法　 测定供试品中杂质的总量限度 采用不加校正因子的峰面积法。取供试品，按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图Ⅰ；;内标法　 测定供试品中杂质的总量限度 再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图Ⅱ。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30%以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度。 ;外标法　测定供试品中含量 按各品种项下的规定，??密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量。 ;二、高效液相色谱仪操作技术 高效液相色谱仪操作步骤如下： 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。;二、高效液相色谱仪操作技术 高效液相色谱仪操作步骤如下： 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。 ;二、高效液相色谱仪操作技术 高效液相色谱仪操作步骤如下： 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。 设计走样方法。 进样和进样后操作。 ;二、高效液相色谱仪操作技术 高效液相色谱仪操作步骤如下： 关机时，先关计算机，再关液相色谱。 填写登记本，由负责人签字。 流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。 ;二、高效液相色谱仪操作技术 高效液相色谱仪操作步骤如下： 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 所有过柱子的液体均需严格的过滤。 压力不能太大，最好不要超过2000 psi。;Contents;高压液相色谱法 一、头孢拉定的定量分析 依据CP2015进行主成分的含量测定。 二、认识常用的定性定量方法 1、定性分析 标准对照法定性 2、定量分析 标准曲线法（外标法）; 未知组分浓度=样品响应值÷f;直接比较法 或 ：标准溶液的质量分数 ：样品溶液的质量分数 ;三、HPLC法测定饮料中咖啡因含量 标准工作曲线法—外标法 四、头孢拉定定量分析 方法来源：CP2015 单点校正法;定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。 ;常用定量分析法;面积归一化法 测定供试品中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。 计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。;面积归一化法 但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外可为该品种项下主成分保留时间的倍数。;主成分自身对照法 当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用该法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照