应用去壁低渗火焰干燥法制备植物染色体标本.docxVIP

实验六 应用去壁低渗火焰干燥法制备植物染色体标本 一、实验目的 1. 学习利用去壁低渗火焰干燥法制备植物染色体标本的技术方法。2．获得分散良好、形态清晰的中期染色体用于核型分析。 二、实验原理 植物染色体标本的制备最常用的方法是压片法，将材料解离后进行染色和压片，但压片 法的不足是由于细胞堆积致使染色体很难彻底分散开。而去壁低渗法则是先用纤维素酶和果 胶酶去除细胞壁，得到原生质体，再将细胞进行低渗处理，即把细胞置于低渗液（低浓度的KCl 或蒸馏水）中，使细胞充分吸水膨胀，染色体分散，平展地铺展在载玻片上，再用火焰干燥让染色体紧贴在载玻片上。此法有效地克服了压片法中存在的染色体分散不开、平展不 良等不足，现已广泛应用于核型分析、染色体显带等研究。 三、实验材料 大蒜根尖（染色体数 2n=16） 四、实验步骤 取材：将大蒜瓣掰开，大头朝下置于白瓷盘中，加上少许水，3-4 天后根长到 1cm 左右， 将根剪下，用蒸馏水洗几次。 预处理：根尖用 0.05%的秋水仙素溶液处理 4h 左右。 固定：用蒸馏水将根洗几次，在甲醇-冰醋酸（3:1）固定液中固定 4h。 酶解：倒去固定液，用蒸馏水洗几次，取10 个左右的根置于载玻片上切取根尖，加入酶液 ，25 ℃ 下 酶 解 2.5h 左 右 。5．低渗：倒去酶液，用蒸馏水洗几次，然后在蒸馏水中浸泡20min。 再固定：吸去蒸馏水，加入固定液固定20min。 滴片：去掉大部分固定液，剩余 0.5ml 左右，用吸管充分吹打根尖，使细胞分散，吸取细胞悬液，滴一到两滴于预冷的载玻片上，迅速吹气，使悬液快速铺展，文火烤干。 8．染色：吸取Giemsa 染液铺于载玻片上，染色 10min。 9．观察：在自来水下小水冲去染液，晾干，在显微镜下观察。五、注意事项 由于分裂细胞主要位于根尖的分生区，所以切取根尖时不宜太短（丢失分裂的细胞），也不宜太长（使分裂细胞在所有细胞中的比率减少），以刚好切下分生区最为适合。 第 7 步用吸管吹打时要充分，尽量使组织块分散成单个细胞，观察细胞悬液看不到漂浮的组织块即可，如果组织块不分散会不利于染色体分散。 载玻片要预先冰冻，进行滴片时，从冰箱中拿出载玻片后必须马上滴片。 由于在进行滴片时，细胞铺展在整个载玻片上，所以染色时要尽量铺满载玻片，注意不要将染液滴到实验台及其它地方。 六、作业：去壁低渗火焰干燥法与压片法相比，其优点是什么？