《羊结膜乳支原体防治技术规程》.pdfVIP

ICS ICS 01.040.65 CCS B 04 TB 团 体 标 准 T/ NAIA×××-×××× 羊结膜乳支原体防治技术规程 Technical regulations for the prevention and treatment of Mycoplasma conjunctivae (征求意见稿) ××××- ××- 发布 ××××- ××- 实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布 羊结膜乳支原体防治技术规程 1 范围 本文件规定了羊结膜乳支原体防治技术的术语和定义、诊断、预防和治疗。 本文件适用于羊结膜乳支原体防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 羊结膜乳支原体病 Mycoplasma conjunctivae 是指由羊结膜乳支原体引发羊的一种呈现多种临床表现的传染病。 3.2 胸膜肺炎样微生物培养基 pleuropnenmonia-like organism medium PPLO 即支原体培养基，主要用于多种支原体的分离和培养 4 4　诊断 4.1　流行病学 羊结膜乳支原体主要感染绵羊和山羊。长途运输、饲养环境变化、气候变化等因素可诱发羊结 膜乳支原体病的发生。病畜的眼、鼻分泌物发生直接接触传播，也可通过蚊蝇、被污染的器具和饲 料发生间接接触传播 4.2　临床症状 初期阶段：病畜单侧眼睛被感染，患眼羞明流泪、眼睑半闭、眼屎增多并伴有脓性分泌物 晚期阶段：双眼受到感染，角膜红肿充血、凸起且浑浊、逐渐变厚呈乳白色，凸起物呈云翳状 遮盖整个眼球 4.3　样本采集 采集眼拭子，冷藏保存。如果 24 h 内不能送达实验室，-20 ℃保存。样品解冻时，置于 38 ℃～ 2 40 ℃水浴解冻。 4.4　分离培养 羊结膜乳支原体液体培养基配制见附录 A.1 ，羊结膜乳支原体固体培养基配制见附录 A.2 ，实 验用水应符合 GB/T 6682 规定。 在无菌操作条件下将采集的眼拭子接种至支原体固体培养基上，每份样品分别接种 3 个固体培 养基。固体培养基放置于含有 5% CO2 培养箱中 37 ℃培养 24h 后，观察菌落形态，在低倍光学显 微镜下呈现出典型的“油煎蛋”样。将其转入操净台中，无菌条件下切取含有多个单菌落的琼脂培 养基，接种于新的 1mL 支原体液体培养基中，置于 37℃恒温摇床中培养 24h 。 4.5　PCR 鉴别诊断 取液体培养物 2 mL ，12 000r/min，离心 2 min ，使用细菌基因组 DNA 提取试剂盒对细菌体沉 淀进行基因组 DNA 的提取。使用 16S rRNA 通用引物：MOLIGEN1-L ACTCCTACGGGAGGCAGCA ， 16SUNI-R GTGTGACGGGCGGTGTGTAC 和 结 膜 乳 支 原 体 特 异 性 引 物 （ McoF1 GTATCTTTAGAGTCCTCGTCTTTCAC McoR1 CAGCGTGCAGGATGAAATCCCTC ，）对细菌分