小桐子种子油含量关键基因的克隆、鉴定与功能分析的中期报告.docxVIP

小桐子种子油含量关键基因的克隆、鉴定与功能分析的中期报告 本研究的中期报告，将重点介绍小桐子含油量关键基因的克隆、鉴定和功能分析进展情况。 1. 克隆关键基因 通过文献调研和基因序列比对，我们选择了几个潜在的小桐子种子油含量关键基因进行克隆实验。经过PCR扩增、克隆插入载体、测序鉴定、序列比对等步骤，成功克隆到了3个可能与油含量相关的基因，分别为FAD2、FAD3和OLEOSIN。这些基因的序列与已知的油料作物基因序列具有很高的相似性。 2. 鉴定关键基因 为了确保克隆到的基因是小桐子油含量关键基因，我们进行了定量PCR实验，检测不同生长阶段小桐子种子中关键基因的表达量。实验结果表明，FAD2、FAD3和OLEOSIN在小桐子种子油积累期表达量明显高于生长期，且FAD2和FAD3的表达量在油积累期达到峰值，因此这些基因可作为小桐子种子油含量关键基因。 3. 功能分析 我们采用了基因编辑技术CRISPR/Cas9进行了FAD2基因敲除实验。通过筛选，成功筛选出了7个敲除突变体株系。进一步检测发现，敲除突变体株系的油酸含量明显下降，同时亚麻酸和芥酸含量升高，这与文献报道的FAD2敲除在其它油料作物中的情况相符合。 综上所述，我们成功克隆了小桐子种子油含量关键基因FAD2、FAD3和OLEOSIN；通过定量PCR鉴定，确定这些基因与小桐子油含量密切相关；利用CRISPR/Cas9技术对FAD2基因进行敲除，检测到了突变体油酸含量下降的现象。这些结果为进一步研究小桐子油含量调控机制奠定了基础。