Sox9基因修饰人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究的中期报告.docxVIP

Sox9基因修饰人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究的中期报告 本实验旨在研究Sox9基因修饰对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）向软骨细胞分化的影响，并探究其可能的机制。以下为中期报告： 材料与方法： 1. hUC-MSCs的提取与培养 通过收集符合条件的脐带组织，使用胶原酶和DNA酶I等消化酶对其进行脐带间充质干细胞的提取。提取的细胞在低糖DMEM培养液和10% FBS下培养，每隔两天更换一次培养液，到细胞密度达到80%~90%时进行下一步实验。 2. 构建Sox9基因慢病毒载体和病毒包装 将包含Sox9基因的质粒和其他所需质粒进行酶切、连接、转化、扩增等过程，待货取纯之后转染到293T细胞中，并采用FPLC（Fast Protein Liquid Chromatography）分离病毒纯化 3. 实验操作 将hUC-MSCs分成对照组和实验组。对照组hUC-MSCs和实验组hUC-MSCs分别接受不同浓度的Sox9基因慢病毒感染，分别培养14天。每3天更换一次细胞培养基，观察细胞形态变化及分化程度。 结果： 1. 细胞形态变化 实验组hUC-MSCs相对于对照组在细胞周围明显出现初期软骨样样本，特别是较高浓度处理组，明显地呈现出直径增大的斑块状成骨细胞结构。对照组hUC-MSCs大多为未成熟的、较为扁平的细胞。 2. 分化程度 实验组hUC-MSCs分化成硬骨、软骨