剑麻根际联合固氮菌的分离、筛选及鉴定的中期报告.docxVIP

剑麻根际联合固氮菌的分离、筛选及鉴定的中期报告 本实验的目的是通过分离、筛选和鉴定剑麻根际联合固氮菌，找到一种有效的菌株，并探究其固氮机制。 1. 分离和筛选剑麻根际联合固氮菌 （1）收集剑麻根际土样 实验采用的剑麻根际土样来自于实验室附近的田间土壤。 （2）制备土壤稀释液 将剑麻根际土样加入10倍体积的无菌水中，经振荡后静置10min，倒出上清水，取下溶液，制备土壤稀释液。 （3）筛选菌株 将土壤稀释液分别接种于盐烤培养基、Ashby培养基和YPDA培养基上，经过筛选后，得到了数个生长优良的菌落。 2. 鉴定筛选出的菌株 （1）形态学鉴定 通过对菌落形态、颜色、透明度等进行观察和比对，初步鉴定了筛选出的菌株为Rhizobium sp.、Azospirillum sp.、Klebsiella sp. 和Bacillus sp.。 （2）生理生化特征鉴定 高效液相色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、荧光原位杂交技术等生理生化鉴定方法进行进一步测试，以确定各菌株的生理生化特征。 （3）16S rRNA基因测序 将已提取的菌株DNA进行PCR扩增，以确定其16S rRNA基因序列，并对序列进行比对和系统发生学树的构建，最终确定其种属和亚种。 3. 探究剑麻根际联合固氮菌的固氮机制 （1）干旱实验 分别在有不同浓度联合固氮菌的培养液中种植剑麻，进行干旱实验并测量剑麻的生长情况