蛋白质的定性定量分析及保存.pptVIP

本文档共64页；当前第27页；编辑于星期三\17点56分 本文档共64页；当前第28页；编辑于星期三\17点56分 在半对数坐标纸上做出标准曲线 注意：标准曲线的斜率会根据所用凝胶浓度而发生微小的改变。 本文档共64页；当前第29页；编辑于星期三\17点56分 2. 凝胶过滤层析法测定分子量 蛋白质在凝胶过滤层析柱中的洗脱体积Ve，与其分子量的关系如下式所示： lg Mr＝K1－K2 Ve 在实验中，只要测得几种蛋白质分子量标准物的Ve，并以它们的lg Mr对Ve作图得一直线，再测出样品的Ve，即可从图中得到样品的分子量。 本文档共64页；当前第30页；编辑于星期三\17点56分 SDS与凝胶过滤法是互补的 凝胶过滤法测得的是蛋白质四级结构（如果它有的话）的分子量； SDS测得的是蛋白质亚基的分子量； 在有2-巯基乙醇（或DTT）存在时，SDS可测得蛋白质每条多肽链的分子量。 综合应用这两种方法，可得到待测蛋白质结构的许多信息。 本文档共64页；当前第31页；编辑于星期三\17点56分 例如： 凝胶过滤法得到的蛋白质分子量：180kD SDS（不加还原剂）结果：45kD SDS（加还原剂）结果：两条蛋白带（15kD和30kD） 则结论是： 该蛋白质由4个相同的亚基组成，每个亚基由两条多肽链经二硫键连