3,5-二硝基水杨酸比色法测定烟草中总糖含量.docxVIP

3,5-二硝基水杨酸比色法测定烟草中总糖含量 草坪的综合使用是草坪行业21年的一项重要研究方向。残余草是卷烟生产过程中产生的烟茎、叶、茎和茎的总称。如果这些废物经济合理地使用，对减少原材料消耗具有重要的现实意义。也就是说，在草坪生产过程中，采用造纸法生产草屑素，可以说是实现草坪剩余使用的有效手段之一。利用造纸工艺生产草屑素，是体现薄工业技术的基本原则，辅之以化工技术。在一定的技术处理方法中，控制香烟的茎、烟末、碎烟片和低次等叶片，可以达到符合香烟制备要求的生产工艺。它是一个新问题。在草坪生产过程中，如何控制作物和其他物质的比例以创造高质量的香烟。 含糖量是衡量烟草品质好坏的重要指标之一.因此,准确地测定废烟草中的总糖含量对回收废料中的含糖物质并用于卷烟再生产过程具有指导作用. 废烟草中的主要成分与正常烟草中所含有效成分基本相似但含量有差异,而目前有关废烟草中的总糖含量测定尚未见报道.笔者采用了3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法对废烟草中的总糖进行了测定.其测定原理是利用还原糖能使DNS还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸,在一定范围内,还原糖的量和棕红色物质的颜色深浅的程度成一定比例关系.笔者对影响测定的多种因素进行了探讨,以期得到最佳测定条件. 1 材料和方法 1.1 斐林试剂的制备 紫外可见分光光度计:755 s;废烟草:许昌卷烟厂;1 mg·mL-1葡萄糖标准液:准确称取105℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg溶于少量蒸馏水中,溶解后移入100 mL容量瓶中,用蒸馏水定容至100 mL,混匀,4℃冰箱中保存备用. DNS试剂:称取6.5 gDNS溶于少量热蒸馏水中,加入2 mol·L-1氢氧化钠溶液325 mL,再加入45 g丙三醇,摇匀,冷却后加水至总体积1 000 mL,贮于棕色瓶中备用. 斐林试剂:A液,称取69.82 g硫酸铜,溶于蒸馏水,并稀释至1 000 mL;B液,称取346 g酒石酸钾钠与100 g氢氧化钠,溶于蒸馏水,完全溶解后,用水稀释至1 000 mL,贮存于橡胶塞玻璃瓶内. 氢氧化钠溶液(20%),Pb(Ac)2溶液(20%),Na2SO4溶液(10%).浓盐酸(以上试剂均为分析纯). 1.2 ph值的测定方法 称取100 g废烟草于2 000 mL的烧杯内,加入1 000 mL的热水,在80℃的水浴加热2 h,然后再过滤,得到浸提糖液.取糖液100 mL(视含糖量而定)于250 mL容量瓶内,加入20 mL的 20% Pb(Ac)2溶液,至沉淀完全为止.并加入20 mL 10%Na2SO4溶液,至不再产生沉淀为止.加水至刻度,摇匀,过滤得上清液.取上清液50 mL于100 mL容量瓶内,加入5 mL的37%浓盐酸.并在68℃水浴加热15 min.取出后流水冷却.然后用20%NaOH溶液调节pH值至7.5左右,加水至刻度,摇匀并静置. 1.3 测试方法 1.3.1 ds-l-pcr法 分别取1 mL蒸馏水及2 mL的DNS试剂,在沸水浴里加热5 min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,用蒸馏水定容至25.00 mL,摇匀.以蒸馏水作参比溶液,在440~800 nm波长范围内,用分光光度计测定各个波长处的光吸收值,得到DNS显色剂的吸收曲线. 取1 mL的1 mg·mL-1葡萄糖标准溶液、1 mL的蒸馏水与2 mL的DNS试剂,其它步骤同上.以空白溶液作参比,在440~800nm波长范围内测定吸收值,得到葡萄糖的吸收曲线. 1.3.2 显色剂的用量选择 分别取一定量的显色剂,1 mL蒸馏水和1 mL 1 mg·mL-1葡萄糖标液显色测定.以1.0 mL蒸馏水代替葡萄糖标准液为空白. 1.3.3 让热水温度影响 将其它条件固定,改变沸水浴时间,测定反应体系的吸光度. 1.3.4 稳定性试验 测定反应体系随时间变化的吸光度. 1.3.5 标准曲线的生产 分别取一定量的1.0 mg·mL-1葡萄糖标准液和蒸馏水.再分别加入DNS试剂2.5 mL,进行显色测定. 1.3.6 材料参比溶液测定 取制备的供试液1.0 mL,加入2.5 mLDNS试剂和1.0 mL蒸馏水,用蒸馏水定容至25.00 mL,摇匀,以蒸馏水作参比溶液测定吸光度. 1.3.7 废烟草总糖含量测定 取制备的试液稀释适当倍数后各5份,每份1.0 mL,按1.3.2项操作.所测样品吸光度值从标准曲线中求出还原糖含量,再计算出废烟草中总糖含量. 1.3.8 采用菲林试剂法测定总糖 2 结果与分析 2.1 检测波长的选择 测定显色剂和葡萄糖标准液在440~800 nm范围内的吸收光谱,实验表明两者在低于480 nm以下所测的吸光度都十分不稳定,所以对于测定无实际意义.DNS试剂在480 nm处达到最大吸收(图1),葡萄糖标准液在500 n