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不同辅料土炮制白术主要有效成分的比较 白术是科百科全科植物的一种干燥的根茎，具有健脾益气、除湿利尿、止汗、安胎等功效。传统认为,白术生品燥湿力强,炮制后可缓和药性,增强健脾和胃、补脾止泻的功效。白术历代炮制方法主要有熬制、土制、炒制、泔制、麸炒、醋制、煨制、焙制等,现代炮制方法多为清炒、土炒、麸炒、蜜炙等,其中土炒是最常见的炮制方法之一。白术土炒起源于晋、唐时期,常用的辅料土有黄土、壁土、灶心土,2005年版《中国药典》(一部)规定使用灶心土。随着社会发展,灶心土越来越难以获得,各地出现的替代品种类不一,常使用的主要有黄土、窑土和赤石脂,均缺乏系统研究,严重影响了土炒炮制品的质量。而不同种类辅料土对土炒白术的质量影响尚未见文献报道。本试验采用历代常用的灶心土、壁土、窑土、黄土、赤石脂等不同“土”作为辅料来炮制白术,对白术生品及各种土炮制品进行化学成分的定性定量比较研究,以白术多糖和白术内酯Ⅲ的含量为测定指标,对各种土炮制白术前后及相互之间的化学成分影响进行初步研究,以探讨白术土炒炮制的意义,同时为辅料土的种类筛选提供依据。 1 设备和材料 1.1 紫外-可见分光光度计 LC10-ATVP型高效液相色谱(HPLC)仪,包括紫外检测器、色谱工作站(日本岛津公司);UV-1100型紫外-可见分光光度计(上海天美科技有限公司);BP211D(十万分之一)、BP121S(万分之一)型电子分析天平(德国Sartorius公司);BUG25-12型超声波清洗机(25 k Hz,500 W,上海必能信超声波有限公司)。 1.2 药都、窑土、黄土 白术内酯Ⅲ标准品(成都曼思特生物科技有限公司,批号:200810,纯度98%);葡萄糖标准品(成都市科龙化工试剂厂,批号;赤石脂于2008年3月购于成都市西南药都;灶心土来自四川广元市剑阁县某农家;窑土来自四川乐山市夹江县某农家;壁土来自四川乐山市夹江县某农家;黄土采自成都市温江区;白术于2008年3月购于西南药都,经成都中医药大学裴瑾教授鉴定为植物白术A.macrocephala Koidz.的干燥根茎;甲醇、乙腈为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 从单次最佳制备到理想炮,并将国内形成真实图像动物,这也和知识产权法 取上述各种土过120目筛的细粉,分别投入热锅中,加热至呈滑利状态时,投入净白术片,迅速翻炒,炒至白术表面均匀挂土色时,取出,筛去土粉,放凉,备用。即得赤石脂炒白术、灶心土炒白术、窑土炒白术、壁土炒白术、黄土炒白术5种白术炮制品。每100 g药材用辅料土20 g。 2.2 不同煎剂中白术芽的含量 2.2.1 流动相、色谱条件 色谱柱:Hypersil-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(65∶35);柱温:30℃;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:220 nm。在此色谱条件下,供试品溶液中白术内酯Ⅲ与其余成分完全分离;理论板数以白术内酯Ⅲ峰计算应不低于3 000。色谱见图1。 2.2.2 标准品贮备液的配制 精密称取白术内酯Ⅲ标准品10.6mg,置于10 m L量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,得标准品贮备液。精密量取标准品贮备液1 m L,置于10 m L量瓶中,加 2.2.3 甲醇溶液制备 分别取白术生品及5种土炒炮制品细粉约1 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20m L,密塞,称重,超声40 min,放冷,再称重,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,精密量取续滤液10 m L,蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至2 m L量瓶中,摇匀,以微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.2.4 线性回归法 分别精密吸取标准品贮备液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00 m L,置于10 m L量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,取上述溶液各10μL,按上述色谱条件测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标,白术内酯Ⅲ进样量(X,μg)为横坐标,进行线性回归,得回归方程为Y=3×106X+12 090(r=0.999 8)。结果表明,白术内酯Ⅲ进样量在0.265~2.120μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.2.5 取白术生品细粉约1 g,共6份,精密称定,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,各吸取10μL,照上述色谱条件测定。结果,RSD=1.32%(n=6),表明方法重复性良好。 2.2.6 精密度测试 精密吸取白术内酯Ⅲ标准品溶液适量,按上述色谱条件重复进样测定6次。结果,RSD=0.97%(n=6),表明仪器精密度良好。 2.2.7 4、84、32、32、32h测定 10μL,按上述色谱条件分别于0、12、24、48、72、96 h测定。结果,RSD=1.23%(n=