液相色谱仪检定规程.docxVIP

液相色谱仪检定 一、简介 液相色谱仪是一类利用混合物在固定相和流动相间分配比的差异,对混合物进行分离、 分析的仪器。可用于分离分析占有机物总数近80%的高沸点、热不稳定、高分子化合物，其 中高效液相色谱仪更具有高速、高效、高选择性、高灵敏度等优点，现已被广泛应用于实验 室、化学化工、生物、医药学、环境、食品等领域。 JJG705-2014液相色谱仪检定规程（以下简称新规程）由国家质量监督检验检疫总局于 2014年2月14日颁布，并于同年8月14日正式实施，用以替代JJG705-2002液相色谱仪检 定规程。 （一）工作原理 液相色谱仪由输液系统（包括输液泵、流动相储器和梯度仪）、进样系统、分离 系统（包括色谱柱和柱恒温器等）、检测系统和数据处理系统等组成。流动相被高压 泵打入系统中，混合样品溶液由进样系统注入，跟随流动相流入色谱柱。由于混合样 品中不同组分在固定相和流动相间的吸附与分配系数不同而产生不同的运动速度 经多次吸附-解析过程逐步分离，由流动相带入检测器中，并转换成电信号输送至记 录仪，以色谱图形式输出，进行定性或定量分析。 （二）检定方法 新规程在后续检定中主要考察仪器以下几项技术指标。 1泵流量稳定性SR 将仪器各部分连接好，流动相用 100%甲醇，通过工作站或仪器操作面板设置检定流 量（如表1所示，选择高、中、低三档流量逐一测定），启动仪器，待压力稳定后，在 流动相出口处用容量瓶（空瓶质量为W1）收集流出液，并同时用秒表计时t。在经检 定合格的分析天平上称重，质量为W2,按式（2）、（3）计算实际所测流量值Fm,重复三 次，得三次实测流量平均值，按式（1）计算SR。SR为三档流量中最大值。 § 队二知goo% F峭 ^=0.791-0-000 93x(T-20) 其中P t为经温度校正后的甲醇密度,T为测定流速时温度。 表1泵流量设定值和收集时间 流量设定值（mL/min） 收集时间（t/min） 0.2?0.5 10?20 0.6?1.0 5?10 1.0 5 2基线噪声和漂移 选用100%甲醇为流动相，流速定为1.0mL/min,C18色谱柱，开启仪器，基线稳定 后记录30min，读取瞬时最大基线峰 -峰高值，再乘以检测器衰减倍数得到基线噪声 （Nd）,30min内基线偏离起始点的最大值为基线漂移 ，均用仪器自身物理量表示。不 同检测器自身物理量和检定条件如表 2所示。 表2检测器自身物理量和检定条件 检测器类型 自身物理量 检定条件 紫外-可见光检测器、二 极管阵列检测器 AU 波长254 nm 荧光检测器 FU 激发波长290 nm 发射波长330 nm 示差折光率检测器 RIU 参比池充满流动相 漂移管温度70°C（低温 蒸发光散射检测器 mV 型35C）、雾化气体流 速2.5?3.0 L/min或气体 压力280?350 kpa 3最小检测浓度 检定条件同2.2,记录进样量V为10~20 u L标准物质（表3）所得色谱图，积分得 色谱峰高H,根据式（4）计算最小检测浓度CL。 2NdcVd 20H 2NdcV d 20H (4) 表3最小检测浓度检定标准物质选用 检测器类型 标准物质 标准物质浓度 紫外-可见光检测器、二 极管阵列检测器 萘-甲醇 1.00 X 10-7 g/mL 荧光检测器 萘-甲醇 1.00 X 10-7 g/mL 示差折光率检测器 甲醇中胆固醇 5.0 u g/mL 蒸发光散射检测器 甲醇中胆固醇 5.0 u g/mL 4整机性能 检定条件同2.2，注入一定体积标准物质（表4）得色谱图，积分得色谱峰保留时 间（用于定性）和峰面积（用于定量），重复6次，根据式（5）分别计算定性、定量重复 性。 心定性成亶）=了\ _ X100% f，） 表4整机性能检定标准物质选用 检测器类型 标准物质 标准物质浓度 紫外-可见光检测器、二 萘-甲醇 1.00 X 10-4 g/mL 极管阵列检测器 荧光检测器 萘-甲醇 1.00 X 10-5 g/mL 示差折光率检测器 甲醇中胆固醇 200 u g/mL 蒸发光散射检测器 甲醇中胆固醇 200 ug/mL 二、检定规程解读 泵流量误差检定中，新规程增加了不同温度下流动相密度的折算公式 ，引入 了温度校正系数（0.00093g/cm3 ?°C-1）,减小了由温度变化引起的误差。但甲醇具 有一定挥发性，所以每次收集完流动相，应迅速盖上瓶塞及时称重，且三次计时和收 集流出液应配合熟练，尽量降低人为误差对泵流量稳定性的影响。 基线稳定性是仪器性能好坏的一项重要指标，液相色谱仪系统中若有未被排 出的气泡则会引起谱带展宽，干扰检测器正常工作，影响基线稳定，使噪声偏大，因 此在运行检定之前应先充分脱气，并用流动相冲洗泵和检测器。 新规程中所有检测器的性