大鼠超氧化物歧化酶SODELISA试剂盒使用说明书.docxVIP

小鼠 β 半乳糖苷酶(β GAL)ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用预期应用 ELISA 法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中 SOD 含量。实验原理 小鼠β 半乳糖苷酶(β GAL)ELISA 试剂盒使用说明书 超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内一种重要的超氧阴离子自由基清除剂，分为 Cu,Zn-SOD、Fe-SOD 和 Mn-SOD 3类，在生物界分布较广，其主要作用是能专一地清除生物氧化中产生的超氧阴离子自由基(O2-.)，有助于减少和阻止脂质的过氧化反应、延缓机体衰老。 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中 SOD 水平。用纯化的抗体包被微孔 板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 SOD 抗原、生物素化的抗大鼠 SOD 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在 过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 SOD 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成 酶联板：一块（96孔） 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀 释液稀释至1ml，其浓度为500U/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成500 U/ml，250 U/mL ，125 U/mL， 62 U/mL，31 U/mL，15.2 U/mL，7.6 U/mL 其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 U/mL，临用前15分钟内配制。 样品稀释液：1×20ml/瓶。 检测稀释液 A：1×10ml/瓶。 检测稀释液 B：1×10ml/瓶。 6. 检测溶液 A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液 A1：100 稀释。 7. 检测溶液 B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液 B1：100 稀释。 底物溶液：1×10ml/瓶。 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液：1×10ml/瓶（2N H SO4）。 2 标本的采集及保存 细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。 血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g 离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液 A 工作液 100ul（取1ul 检测溶液 A 加99ul 检测稀释液 A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟， 350ul/每孔，甩干。 每孔加检测溶液 B 工作液（同检测 A 工作液） 100ul，37℃，60分钟。 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟， 350ul/每孔，甩干。 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟以内,此时肉眼可 见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 用酶联仪在450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 注： 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调 OD 值至零。 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液 A 工作液、检测溶液 B 工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液 A 工作液或检测溶液 B 工作液。 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 小鼠 β 半乳糖苷酶(β