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流式细胞仪上机操作培训手册 一、样本解决 以 PBMC 表面抗原的流式检测环节为例 取样。取新鲜提取或冻存后复苏的 PBMC； 编号。根据实验设计，标记好流式管，如每份 PBMC 设两管： 1 号管：对应同型对照； 2 号管：CD3,CD4,CD8,CD56 四标管； 加样。用移液器取 100ul 细胞/管（约 1×106 个细胞/管），分别加到已经标记好的流式管底部； 洗涤。加入 1ml PBS/管，涡旋 1600rpm/min，离心 6min； 染色。弃上清，加入 100 μl PBS/管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流式管中加入对应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育 30min（操作尽量保持在避光条件下进行。） 洗涤。加入 1ml PBS/管，涡旋 1600rpm/min，离心 6min； 重悬。弃上清，加入 0.5ml PBS/管，混匀，上机检测(可选择 BD FACSCanto II 或 BD Accuri C6)。 （注：若不能及时上机，应加入 4%多聚甲醛固定，并于 4℃避光保存。） 8） 实验成果分析。 （注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光赔偿）。 参考值： CD3+ 60.8-75.4% CD4+ 29.4-45.8% CD8+ 18.2-32.8% NK（CD3-CD56+） 9.5-23.5% 二、上机检测 BD FACSCanto II 简要