生物选修三介绍.pptx

生物选修三 复习 专题一 基因工程 一 、概念： 是指按照人们的愿望 ， 进行严格的 设计 ， 通过体外DNA重组和转转基基因因技技术术，， 赋予生物以新的遗传特性 ， 创造出更符 合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程是在DDNNAA分分子子水水平平上上进进行行设设计计 和施工的 ， 又叫做DNA重组技术 。 来源： 主要是从原原核核生生物物中中分分离离纯纯化化出出来来的的。。 功能： 能够识别双链DDNNAA分分子子的的某某种种特特定定的的核核苷苷酸酸序序列列，， 并并且且使使每每一一条条 链中特定部位的两个核核苷苷酸酸之之间间的的磷磷酸酸二二酯酯键键断断开开，， 因因此此具具有有专专一一性性。。 结果： 经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 黏性末端和 平末端 。 E•coliDDNNAA连连接接酶酶::只只能能将将双双链链DDNNAA片片段段互互补补的的黏黏性性末末端端之之间间的的磷磷酸酸二二 酯酯键键连连接接起起来来 T4-DNA连接酶 :能缝合两种末端 ， 但连接平末端的之间的效率较低 “分子手手术术刀刀””————限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶（（限限制制酶酶）） “分子缝合针 ”— — DDNNAA连连接接酶酶 “分子运输车 ”— — 载体 DNA连接酶 二 、工具 限制酶 种类 条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存 。 ②具有一至多个限制酶切点 ， 供外源DNA片段插入 。 ③具有标记基因 ， 供重组DNA的鉴定和选择 。 ④对受体无害 最常用的载体： 质质粒粒,,它它是是一一种种裸裸露露的的、、结结构构简简单单的的、、独独立立于于细细菌菌染染色色体体之之 外 ， 并具有自我复制能力的双链环状DDNNAA分分子子。。 其它载体： 噬噬菌菌体体的的衍衍生生物物、、动动植植物物病病毒毒 不同点 磷酸二酯键断开 连接两个DNA片段的末端 ， 形成磷 酸二酯键 将单个核苷酸加到已有的核苷酸片 段的末端 ， 形成磷酸二酯键 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 限制酶 、DNA连接酶 、DNA聚合酶的比较 都作用于磷酸二酯键 相同点 载体 三 、基因工程的基本操作程序 第一步： 目的基因的获取 目的基因： 主要是编码蛋白质的基因 。 获取方法： 1 、 从基因文库中获取 。 2 、利用PCR技 术扩增 。 3 、人工合成 PCR技术扩增目的基因 原理： DNA双链复制 过程： 第一步： 变性 加热至90～95℃DNA解链； 第二步： 退火 冷却到55～60℃ , 引引物物结结合合到到互互 补DNA链； 第三步： 延伸 加热至70～75℃ , 热 稳定DDNNAA聚聚合合酶酶从从引引物物起起始始互互补补链链的的合合成成。。 第二步： 基基因因表表达达载载体体的的构构建建 1. 目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在 ， 并 且可以遗传至下一代 ， 使目的基因能够表达和 发挥作用。 2.组成： 目的基因＋启启动动子子＋＋终终止止子子＋＋标标记记基基因因 （ 1） 启启动动子子：： 是是一一段段有有特特殊殊结结构构的的DDNNAA片片段段，， 位于基因的首端 ， 是RRNNAA聚聚合合酶酶识识别别和和结结合合的的 部位 ， 能驱动基基因因转转录录出出mmRRNNAA，， 最最终终获获得得所所 需的蛋白质。 （2） 终止子： 也是一段有特殊结构的DNA片段 ， 位于基因的尾端。 （3） 标记基因的作用： 是为了鉴定受体细胞中 是否含有目的基因 ， 从而将含有目的基因的细 胞筛选出来 。 常用的标记基因是抗生素基因。 • 第三步： 将目的基因导入受体细胞 1.转化的概念： 是目的基因进入受体细胞内 ， 并且在受 体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法： 植植物物细细胞胞：： 农农杆杆菌菌转转化化法法，， 基基因因枪枪法法和和 花花粉粉管管通通道道法法 等。 动物细胞： 显微注射技术 。此方法的受体 细胞多是受精卵。 微生物细胞： 原原核核生生物物作作为为受受体体细细胞胞的的原原 因是繁殖快 、 多为单细胞 、遗传物质相对 较少 ， 最常用的转化方法是Ca2+处理法： 先用Ca2+处理细胞 ， 使其成为感感受受态态细细 胞胞 ，， 再再将将 重重组组表表达达载载体体DDNNAA分分子子 溶溶于于缓缓冲冲 液液中中与与感感受受态态细细胞胞混混合合，， 在在 定定的的温温度度下下一 促进感感受受态态细细胞胞吸吸收收DDNNAA分分子子，， 完完成成转转化化 过程。 第四步： 目的基因的检测和表达 1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插 入了目的基因 ， 方法是采用