药物制剂方案设计-牛黄解毒片的分析（实验方案设计）.docVIP

药物制剂方案设计-牛黄解毒片的分析（实验方案设计） 牛黄解毒片的分析（实验方案设计） 一、实验目的 1、掌握牛黄解毒片的理化鉴别方法。 2、熟悉牛黄解毒片中黄酮、黄芩等的含量测定方法。 二、实验原理 牛黄解毒片由人工牛黄、雄黄、大黄、黄芩、桔梗、冰片制备而成，雄黄和大黄以细粉直接压片，可利用显微特征进行鉴别。冰片具有升华性并显香草醛硫酸反应。利用薄层色谱法分别鉴别牛黄解毒片中的人工牛黄（胆酸）、大黄（大黄素）、黄芩（黄芩苷）等。 三、实验方法 （一）、鉴别 1.大黄的鉴别(显微)： 1.1 原理大黄的纤维结构中含草酸钙簇晶众多、形大、棱角大多短钝，而且黄色鲜明的特征明显。 1.2取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶大，直径60～140 m。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。 2.冰片的鉴别： 2.1原理冰片具挥发性，易升华，点燃发生浓烟，并有带光的火焰。与香草醛硫酸具有玫瑰红颜色的反应。 2.2 仪器：薄层硅胶G板。 2.3试剂和试药：试药为冰片对照品（中国药品生物制品检定所），试剂为分析纯；牛黄解毒片；乙醚，乙酸乙酯，苯-醋酸乙酯(19∶1)。 2.4测定： 2.4.1 标准品液制备：精密称取冰片对照品1mg，加乙酸乙酯配制0.5mg/mL的溶液2ml。 2.4.2 样品液制备：取5片牛黄解毒片，研细，加乙醚10mL，超声10min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2mL使溶解，作为供试品溶液。 2.4.3 冰片的TLC检识：取对照品液及供试品液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)展开，晾干，用新配制的1%香草醛硫酸溶液显色，在110℃烘数分钟。 3.人工牛黄的鉴别： 3.1 原理：人工牛黄中胆红素在紫外灯( 365nm) 下检视供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上均显示相同颜色的斑点。 3.2仪器：薄层硅胶G板。 3.3试药和试剂：人工牛黄对照药材，胆红素对照品( 中国药品生物制品检定所)；牛黄解毒片；石油醚，三氯甲烷，甲酸乙酯，甲酸，石油醚( 30 ～60 ℃) －三氯甲烷－甲酸乙酯－甲酸( 20∶3∶5∶1)。 3.4 乙酸乙酯萃取法： 3.4.1 供试品的制备：取本品4片，研细，加乙醚30ml ，超声处理1 5分钟，滤过，弃去乙醚，滤渣挥尽乙醚，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml,加热使溶解，滴加盐酸调节p H值至2~3，加乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。 3.4.2 对照品的制备：另取人工牛黄对照药材20m g ，加三氯甲烷20ml,加10%亚硫酸氢钠溶液1滴，摇匀，自超声处理15分钟起，同法制成为对照药材溶液。 3.4.3方法照薄层色谱法（附录W B )试验，吸取上述两种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20 ：25 ：3 ：2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热约10分钟，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 4.大黄的鉴别： 4.1 原理：利用牛黄解毒片中胆酸的薄层鉴别供试液直接作为大黄的薄层鉴别的供试液点于硅胶H 薄层板, 以石油醚：甲酸乙酯：甲酸( 15:5:1) 为展开剂, 展开晾干, 置紫外灯( 365) 下检视。 4.2 仪器：硅胶H 薄层板 4.3 试药及试剂：牛黄解毒片，大黄对照药材，大黄素对照品, 石油醚, 甲酸乙酯, 甲酸,石油醚:甲酸乙酯:甲酸( 15:5:1) 4.4 测定： 4.4.1 供试品的制备取本品1片，研细，加甲醇20ml,超声处理15分钟，滤过，取滤液10ml ，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸lml,加热回流30分钟，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。 4.4.2 对照品的制备取大黄对照药材0. lg,同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。 4.4.3 方法照薄层色谱法（附录YI B)试验，吸取上述三种溶液各4ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30?60°C)-甲酸乙酯-甲酸（15 ：5 ：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。 5.黄芩的鉴别： 5. 1原理黄芩苷喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点。 5.2仪器硅胶G薄层板