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猪传染性胃肠炎基因工程活疫苗的构建与免疫原性测定的开题报告
猪传染性胃肠炎(Porcine Epidemic Diarrhea，简称PED)是由病毒引起的猪的一种急性、高度传染性肠胃疾病，主要表现为腹泻、呕吐、脱水等症状，极易在养殖场内爆发并造成巨大的经济损失。因此，研发有效的PED疫苗是防控PED的重要手段之一。
目前，PED疫苗主要分为生物制品疫苗和基因工程疫苗两种，其中基因工程疫苗具有生物制品疫苗所不具备的优点，如安全性高、反应原性强等。因此，开展PED基因工程疫苗构建研究是非常有必要的。
本研究旨在构建PED基因工程疫苗并进行免疫原性测定，具体研究内容如下：
1. PED病毒复制酶(NsP9)的克隆和表达
将PED病毒Nsp9基因克隆，并将其连接到表达载体中，利用纯化蛋白表达系统表达Nsp9蛋白，并进行纯化。
2. 构建基于Nsp9的重组质粒
将Nsp9基因克隆到PET28a载体中，得到重组质粒PET28a/Nsp9，并进行限制性酶切和测序验证。
3. 体外表达和纯化重组Nsp9蛋白
通过转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞系，利用IPTG诱导系统表达重组Nsp9蛋白，并进行纯化。
4. 免疫原性测定
通过Western blotting和ELISA等方法，对重组Nsp9蛋白的免疫原性进行测定。
本研究的主要贡献在于构建PED基因工程活疫苗，并通过免疫原性测定，为其后续的临床应用奠定基础。
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