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1,8-桉叶油素对小鼠急性毒性及蓄积性研究 1.8-桉叶油素（1.8-cineole，c10h18o）是无色透明的油液体。它具有樟脑、辣、甜的味道。主要存在于桉树、油樟树等芳香植物的提取物中。它是中国食品添加剂（gb10351-2008）。研究表明, 1, 8-桉叶油素具有抗氧化、抗菌、杀虫、镇痛抗炎和促进透皮吸收渗等作用, 已广泛用于香料、食品、医药、化工和国防等领域。Santos研究了1, 8-桉叶油素对大鼠经口急性毒性, 其LD50为 (2.85±0.33) g/kg。余永莉等研究发现桉树叶挥发油对小鼠的经口LD50为1824.01mg/kg, 属低毒物品, 无明显遗传毒性, 无胚胎毒性和致畸作用。张笑乐等研究发现油樟叶挥发油对家兔皮肤无光毒性, 对完整皮肤无刺激性, 中等剂量对破损皮肤有可逆性刺激性, 对眼睛有一定刺激性。而对油樟叶挥发油中1, 8-桉叶油素的毒性研究未见报道。本文研究了1, 8-桉叶油素对小鼠的经口急性毒性和蓄积毒性, 为其安全性评价提供实验依据。 1 材料和方法 1.1 实验动物及饲料 1, 8-桉叶油素由油樟叶挥发油中分离, 纯度大于99.5%, 购自宜宾市江南香料厂, 批吐温-80分析纯, 成都市科龙化工试剂厂。 清洁级昆明小鼠体重为18~22g, 购于成都达硕实验动物研究所, 合格证号:SCXK (川) 2008-24。小鼠专用生长维持饲料, 常规方式饲养, 自然采光, 自由采食饮水。 AL204电子天平梅特勒-托利多仪器有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1 小鼠经口急性毒性实验 将1, 8-桉叶油素用2%吐温-80配制成分散体系, 用蒸馏水稀释成不同浓度的溶液, 以2%吐温-80为溶剂对照, 按小鼠体重灌胃。预实验结果表明小鼠经口灌胃1, 8-桉叶油素0%和100%死亡剂量估计值分别为3000mg/kg和5000mg/kg。正式实验取60只小鼠随机分为6组, 每组10只, 雌雄各半, 灌胃前禁食16h, 不禁水。1~5组为染毒剂量组, 组间剂量比为1.14, 一次性灌胃分别为2960.39、3374.85、3847.33、4385.96、5000mg/kg·bw, 第6组为溶剂对照组。灌胃染毒后连续观察14d, 记录小鼠精神、摄食、饮水、呼吸、活动、死亡及病理学变化情况, 采用改良寇氏法计算LD50。 取40只小鼠随机分为2组, 每组20只, 雌雄各半, 采用固定剂量法染毒, 实验组小鼠每天经口染毒1/5LD50(769.47mg/kg) 剂量的1, 8-桉叶油素, 连续灌胃染毒28d, 对照组小鼠给予同剂量的溶剂。实验期内小鼠累计死亡数达50%, 终止实验。按K=LD50 (n)/LD50 (1)计算累积系数 (K) , 以评价化合物对机体蓄积性毒性的大小, 是判断化合物是否引起潜在慢性中毒的依据之一, 其中LD50 (n)为固定剂量多次染毒引起半数小鼠死亡的总累积剂量, LD50 (1)为一次染毒引起半数小鼠死亡的剂量。实验期间观察记录小鼠的精神、食欲、饮水及死亡情况, 实验结束剖杀各组小鼠, 观察组织病理变化, 计算饲料利用率 (每食入100g饲料所增长的体重克数) 和脏器指数 (某脏器与单位体重之比值)。 1.2.3 数据计算 2 结果与分析 2.1 -桉叶油素对小鼠的急性毒性 小鼠染毒后活动减少, 严重者出现呼吸急促或呼吸困难、精神萎靡、俯卧、拱背、不食等症状, 1h~4d内先后死亡;轻者出现反应迟钝、精神不振、食欲减弱等症状, 4d后不再死亡, 逐步恢复正常。对照组小鼠精神、摄食、饮水、呼吸及活动未见异常, 无死亡现象。剖检死亡小鼠可见小鼠胃和小肠轻度胀气, 轻度充血, 肝肾有少量出血点, 其余组织器官未见明显异常变化。小鼠死亡情况见表1, 采用改良寇氏法计算1, 8-桉叶油素对小鼠的经口LD50为3847.33mg/kg, LD5095%置信区间为3352.80~4414.82mg/kg。与Santos报道的1, 8-桉叶油素对大鼠经口LD50(2.85±0.33) g/kg相比, 本实验测得的小鼠经口LD50较高, 按化学品毒理学分级标准均为低毒化学品。1, 8-桉叶油素对哺乳动物的急性毒性可能与动物种属有关。Vincenzi等报道大鼠对桉叶油素的敏感性比小鼠高, 大鼠在600mg/kg剂量经口染毒时出现毒性反应, 小鼠在1200mg/kg剂量下仍未观察到毒性反应。刷尾负鼠能耐受每天食用含3.6g/kg1, 8-桉叶油素的饲料。人在误食桉叶油后可出现急性中毒反应, 主要表现为心跳加速、呼吸急促、恶心、呕吐、无力、嗜睡, 甚至昏迷等症状, 也有小孩误食3.5~5mL桉叶油引起死亡的报道。实验结果表明, 1, 8-桉叶油素急性中毒时可引起小鼠肝肾轻度损伤