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从脏象学说论脾虚证的蛋白质组学内涵 中医认为，脾脏的主运化是“后天”和“气血生化的源头”。脾脏的主运化不仅涵盖了食物和样品的吸收，还包括体内物质和能量代谢的代谢。此外，它也与身体的各种生理活动密切相关。研究认为:脾(胃)是以消化系统为主的多系统、多器官的综合功能单位,它涉及现代医学的消化、神经、免疫、内分泌、血液等系统的部分功能。虽然诸多学者已对脾虚证候的本质进行了大量研究,但基于蛋白质组学技术方面的研究较少。蛋白质组学是研究一个细胞、组织、器官或有机体在一定时间或一定状态下所表达的所有蛋白质,其研究重心是某一层次所有蛋白质及动态变化规律。本文将对基于蛋白质组学技术的脾虚证候本质方面的研究进行探讨分析。 1 临床表现及病证认识 脾位中焦,五行属土,被誉为“万物之母”、“后天之本”,历代医家精于对脾脏的理论研究,形成了独特的中医脾胃学说。脾脏的病理变化常以虚证为主,脾虚证表现为脾气虚证、脾阳虚证和脾阴虚证。脾主运化是维持机体各种功能活动的基础,“脾虚则百病由生”,临床上几乎所有的疾病都有脾虚证型。脾虚脾失健运所引起的病证涉及到多个系统。 证候是对疾病一定阶段病理生理变化的概括,反应了不同个体在疾病过程中一定阶段的病因、病位、病性、邪正盛衰和病变趋势及转归等本质,表现为临床可被观察到的一组具有内在联系的症状群。脾虚证是脾生理功能失常的病理基础。脾虚则运化无权,水谷、津液失运,致气血乏源、气不化津、聚湿生痰,以及脾不统血、枢机不利、清阳不升、四肢不充等一系列病理变化,表现为腹胀便溏、纳呆食少、痰饮水肿、内脏下垂、耗血动血、气血双亏、经脉失养等多种病症。可见,脾虚证状态下机体发生了是一系列具有内在规律的病理变化,它是“百病由生”的病理基础,因此,探讨和揭示脾虚证的本质不仅可以丰富完善中医脏象理论,更为临床各科疾病从脾论治提供科学依据。 2 实验指标的研究 脾虚证是中医临床最为常见的证候之一,据报道目前已经涉及80项以上的实验指标。脾主运化是脾生理功能的基础,脾虚往往表现为脾主运化功能减退而出现的一系列症状。 2.1 对脏器电慢波和腰椎电慢波的影响 慢性胃脘痛脾胃虚弱组患者胃排空时间较正常组明显缩短。脾气虚大鼠胃排空率下降,但十二指肠电慢波节律、振幅、运动指数较变化则不显著,结肠环形肌运动频率与正常组接近,而振幅显著高于正常组。 2.2 对大鼠肠道黏膜炎性的影响 脾气虚大鼠胃黏膜比正常大鼠薄,胃腺数量有不同程度的减少,并且腺体变小,胃主细胞、壁细胞数量有不同程度的减少。光镜下脾气虚大鼠胃肠黏膜上皮局灶坏死脱落,可见炎性渗出,胃腺、肠腺萎缩;透射电镜下见上皮细胞内含有大量自噬泡,腺体萎缩,黏膜下层水肿,细胞排列疏松,脾虚小鼠小肠绒毛变细变短,肠上皮变矮,柱状上皮立方形改变,固有膜空泡样改变,肠黏膜微绒毛排列稀疏紊乱,长短不一。 2.3 胃壁细胞胃泌素受体结合位加强 脾虚大鼠多种胃肠激素如生长抑素、血管活性肠肽(VIP)、β-内啡肽(β-EP)、神经肽Y(NPY)水平异常,血浆胃泌素(Gas)水平下降,胃壁细胞胃泌素受体结合位点数明显降低。脾虚早期(7天),组织及血浆中胆囊收缩素(CCK)、血浆胃动素(MOT)含量均升高,脾虚晚期(14天),MOT在组织和血浆中含量均下降,CCK在下丘脑及胃窦组织中含量升高,在血浆和肠道组织中含量下降。脾虚证大鼠胃窦部P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量均明显降低,提示脾虚证胃肠肽分泌异常与胃动力失调有一定关系。 2.4 采出液化学变化 脾气虚证大鼠模型LPO(脂质过氧化物)及其相关抗氧化酶的变化,使生物膜受到攻击而导致结构、功能异常,可能是脾气虚证的分子生物学机制之一。脾阳虚证大鼠肠血液中丙二醛(MDA)含量升高,硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GSH-Px)活性以及Se-GSH-Px/MDA比值显著下降,提示脾阳虚时机体的过氧化速率增强,抗氧化能力下降。结肠癌脾虚证患者病理组织中P53、Bcl-2蛋白的阳性表达率及表达水平显著高于非脾虚组,Bax蛋白阳性表达脾虚组低于非脾虚组,但无显著性差异。随着组学技术的发展,基因组学技术被引入脾虚研究领域。基因芯片技术研究发现,脾虚证实质涉及大脑皮层和海马的基因表达谱改变,有150余条基因的表达与对照组比较有明显差异,并且显示与能量代谢、蛋白质合成、DNA合成及与免疫功能等相关基因的表达普遍下调。 3 膜组学技术在特殊证候研究中的应用 科技在医学领域的迅猛发展,现代生物学技术已经深入到后基因组—功能基因组的研究,而蛋白质组学是功能基因组研究的一个重要技术支撑体系。蛋白质组为生物机体、组织、细胞在特定的时间和空间表达的所有蛋白质。蛋白质组学可以从整体水平上反映特定状态下蛋白质表达的动态演变过程,其特点是采用高通量、高分辨率的蛋白鉴定技