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葡萄中赭曲霉毒素A的测定

高效液相色谱法

1范围

本文件规定了葡萄中赭曲霉毒素A的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于葡萄中赭曲霉毒素A的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的

引用文件，仅注明日期的版本适用于本标准。凡是不注明日期的引用文件，其最

新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB5009.96-2016食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A的测定

GB23200.121-2021食品安全国家标准植物源性食品中331种农药及其代

谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3原理、定义和先进性

3.1原理和定义

QuEChERS方法：利用吸附剂填料与基质中的杂质相互作用，吸附杂质从

而达到除杂净化目的的前处理方法。试样用乙腈提取，然后使用萃取盐液液分层，

采用分散固相萃取，使用石墨粉等吸附剂进行净化，取上层液进行高效液相色谱

检测，外标法定量。

3.2先进性

（1）回收率高；（2）精确度和准确度高；（3）可分析的物质范围广；（4）

分析速度快；（5）溶剂使用量少，污染小，价格低廉且不使用含氯化物溶剂；

（6）操作简便，无需良好训练和较高技能便可很好地完成；（7）乙腈加到容器

后立即密封，使其与工作人员的接触机会减少；（8）样品制备过程中仅使用很

少的玻璃器皿，装置简单。

4试剂和材料

4.1试剂

乙腈（色谱级）。

甲酸（色谱级）。

氯化钠（NaCl）。

无水硫酸镁（MgSO）。

4

石墨粉（CAS:7782-42-5），纯度≥99.8%。

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的

一级水。

4.2标准品

赭曲霉毒素A（CHClNO,CAS号：303-47-9），纯度≥99%。

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4.3标准溶液配制

取赭曲霉毒素A标准品1.0mg置于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，

配制成浓度为100mg/L的赭曲霉毒素A标准溶液，4℃下避光保存。

5仪器和设备

5.1液相色谱仪

配有荧光检测器（FLD）。

5.2离心机

转速不低于12000r/min。

5.3电子天平

感量0.1mg和0.01g。

6分析步骤

6.1试样制备、提取与净化

6.1.1试样制备

样品测定部位按照GB2763-2021中附录A的规定执行。称取10.0g经料理

机破碎的葡萄样品置于50mL离心管。

6.1.2提取

加入10mL乙腈（1%甲酸），手动震荡1min，再依次加入1.0g氯化钠、

4.0g无水硫酸镁，手动震荡1min，在8000r/min离心5min。

6.1.3净化

取1mL6.1.2部分上清液移入另一装有150mg无水硫酸镁和80mg石墨粉

的2mL离心管中，手动震荡1min，12000r/min离心5min，用1mL注射器抽

取上清液过0.22µm滤膜，待HPLC检测。

6.2试样测定

6.2.1高效液相色谱条件

C18色谱柱（3.0mm×150mm，2.7μm），或相当者；流动相A：0.1%甲

酸水溶液，B：乙腈；采用梯度洗脱，流速0.50mL/min；柱温30℃；进样量

10μL；检测器FLD，激发波长Ex：334nm，发射波长Em：460nm。

梯度洗脱程序：0min～5min：流动相A：50%，流动相B：50%，流量为

0.5mL/min；5min～10min：流动相A：30%，流动相B：70%，流量为0.5mL/min；

10min～15min：流动相A：10%，流动相B：90%，流量为0.5mL/min；15min～

18min：流动相A：50%，流动相B：50%，流量为0.5mL/min。

6.2.2基质匹配标准工作曲线

选择与被测样品性质相同或相似的空白样品，按照步骤6.1部分进行前处理，

得到空白基质溶液。准确移取一定量的赭曲霉毒素A标准储备液（4.3部分）用

空白基质溶液稀释，分