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快速监测度洛西汀血药浓度的方法

1范围

本文件提供了快速监测度洛西汀血药浓度的方法，该方法采用二维色谱仪系统，包括制备溶液、设

置色谱参数、实施检测以及计算含量。

本文件适用于快速监测度洛西汀血药浓度的方法。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4技术方案

一种快速监测度洛西汀血药浓度的方法，采用二维液相色谱仪系统，二维液相色谱仪系统为PM3000

系统，包括带在线脱气单元的双三元梯度泵、自动进样器、辅助泵、带有一个六通阀的柱温箱和检测器

DAD。

制备溶液

制备溶液的方法比较灵活，在这里不做限定。

蛋白沉淀剂为硫酸锌溶液溶液和乙腈的混合物，其中硫酸锌纯度不低于98%，可市售获得。硫酸锌

溶液的质量浓度为3%~5%,硫酸锌溶液与乙腈的体积比为1：（1~10）。

4.1.1空白血浆溶液

取正常人空白血浆2mL，加入蛋白沉淀剂稀释定容至10mL，混合后超声5min，将上述溶液转移至

EP管中，于离心机中以10000rpm离心10min，取其上清液，经0.22µm的尼龙滤膜过滤，得到的滤液

作为空白血浆溶液。

4.1.2系统适用性溶液

取盐酸度洛西汀对照品51.64mg（相当于度洛西汀46mg），精密称定，加入甲醇溶解，定容至100

mL，得到浓度为0.46mg/mL的度洛西汀储备液；精密量取度洛西汀储备液1mL至10mL的容量瓶中，用

甲醇稀释定容，得到浓度为46μg/ml的度洛西汀标准溶液。取10μL46μg/ml的度洛西汀标准溶液于

10mL的容量瓶中，加入空白血浆2mL，加入蛋白沉淀剂稀释定容至10mL，混合后超声5min，得到每1

mL中含46ng的度洛西汀溶液，将上述溶液转移至EP管中，于离心机中以10000rpm离心10min，取其上

清液，经0.22µm的尼龙滤膜过滤，得到的滤液作为系统适用性溶液。

4.1.3标准曲线溶液

将上述46μg/ml的度洛西汀标准溶液稀释500倍，得92ng/mL的线性储备液，采用倍比稀释法逐级

稀释得到不同浓度的度洛西汀工作溶液，分别精密量取上述度洛西汀线性储备液各5mL至10mL、4mL

至10mL、3mL至10mL、2mL至10mL、2.5mL至50mL容量瓶中，每个瓶中加入空白血浆2mL，加入

蛋白沉淀剂稀释定容，混合后超声5min，将上述溶液分别转移至EP管中，于离心机中以10000rpm离心

10min，取其上清液，经0.22µm的尼龙滤膜过滤，分别得到浓度为46ng/mL、36.8ng/mL、27.6ng/mL、

18.4ng/mL、4.6ng/mL作为标准曲线溶液，按照上述46μg/ml的度洛西汀标准溶液的配制方法，另外

配制一份27.6ng/mL的度洛西汀标准品溶液作为含量测定溶液，用来按照外标法计算样品中度洛西汀的

浓度。

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4.1.4供试品溶液

取正在进行盐酸度洛西汀治疗的患者的人体血浆2mL至10mL的容量瓶中，加入蛋白沉淀剂混匀并

稀释定容，混合后超声5min，将上述溶液转移至EP管中，于离心机中以10000rpm离心10min，取其上

清液，经0.22µm的尼龙滤膜过滤，得到的滤液作为供试品溶液。

设置色谱参数

在二维液相色谱仪系统系统上设置一维柱色谱条件的参数、二维柱色谱条件的参数和大体积进样条

件的参数和阀切换条件的参数，并使用空白血浆溶液和系统适用性溶液确认，待二维液相色谱仪系统系

统的压力和基线平衡稳定后，注入不少于5针空白血浆溶液和系统适用性溶液用来确认。

实验用的二维液相色谱仪系统为PM3000系统，包括带在线脱气单元的双三元梯度泵、自动进样器、

辅助泵、带有一个六通阀的柱温箱和检测器，上述双三元梯度泵包括一维泵和二维泵，一维泵用于在线

固相萃取，二维泵用于色谱分析，吸附在一维柱的度洛西汀通过六通阀切换到分析流路中，可以将原来

用4~5h进行固相萃取前处理的样品缩短至3min左右在线完成，净化和浓缩后的度洛西汀样品直接进行定

量分析。上述六通阀设置的阀口位置顺序为阀1、阀2、阀3、阀4、阀5和阀6。

如图1，一维柱色谱条件和二维柱色谱条件通过阀切换技术的系统配合的工作原理如下：

a)