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单克隆抗体制备实验过程

Preparedon22November

单 克 隆 抗 体 制 备 实 验 过 程

一、免疫动物

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。普通选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制订的免疫方案进行免疫注射。

抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激对应B淋巴细胞克隆

，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

阐明：FCA，弗氏完全佐剂；FIA，弗氏不完全佐剂；Quickantibody，北京康碧泉公司研制的佐剂。上表中第四种免疫办法产生的抗体大部份都为IgM，存在亲和力弱等缺点，慎用。

PS：1、普通皮下注射每个注射点注射30-

50ul左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点为宜。

2、腹腔注射时，如果抗原混有弗氏佐剂，建议注射在左侧腹腔，如果采用右侧腹腔注射，则在免疫过程中，很容易造成小鼠脾脏与腹膜粘连的状况

，造成后期取出脾脏麻烦。

3、冲击免疫完毕后，应在96小时内完毕细胞融合，否则对应的B细胞数量会下降到未冲击前的水平。

二、细胞融合（Cellfusion）

【材料和试剂】

（ 1） 骨 髓 瘤 细 胞 悬 液

选好骨髓瘤细胞株，取体外培养对数生长久细胞或体内生长的肿瘤分离骨髓瘤细胞，制备细胞悬液。

（ 2） 免 疫 小 鼠 脾 细 胞 悬 液

取3天前加强免疫的小鼠，眼眶放血，分离血