干细胞培养全攻略.docxVIP

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ES细胞培养

A.FBS的灭活与分装1.化冻

将血清（FetalBovineSerum，Hyclone）从－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱

化冻过夜；也可室温（或浸于自来水中）化冻，化冻后若不马上灭活，可以放入4℃冰箱暂时保存；

灭活

放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个内装200ml自来水的血清瓶，插入一根温度计，温度监控以此为准）；

当温度计显示56℃时，控制在此温度30分钟±3分钟；若不小心使温度上升超过56℃，则：

若仍未超过60℃，且时间很短（比如：

不超过5分钟），则仍可使用；若超过60℃，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于ME细胞的培养；

（2）取出，自然冷却至室温（约需1－3小时），可分装或－20℃继续冻存；

分装

转入细胞间，用移液器将血清分装，注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；吹出血

清时要注意：

不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果已产生气泡，则在酒精灯火焰上过一下）；标好批号和日期；

放入－20℃冰箱冻存(分装一次大约可以使用1—2个月)。

B.配制DMEM血清培养基

提前一天将分装好的FBS从—20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化冻；

在细胞间中将FBS以及其它需要添加的成分（如，丙酮酸钠、抗生素等），按照比例加入DMEM培养基中，作好标签；放