EIA突变体腺病毒载体的构建及其对肿瘤细胞生长影响的初步研究的开题报告.docxVIP

EIA突变体腺病毒载体的构建及其对肿瘤细胞生长影响的初步研究的开题报告

研究背景与意义：

EIA（EarlygrowthresponseproteinIA）是转录因子家族中的一员，在细胞生长、分化、凋亡等方面均具有重要作用。此外，EIA在多种肿瘤的发生、发展中也发挥着重要的调节作用，因此成为了肿瘤治疗方面的研究热点。目前，研究表明EIA基因的缺陷或削弱会导致肿瘤细胞的凋亡和生长停滞，因此，外源性介导EIA的高效表达和活化成为了一些治疗手段的重要途径之一。

在现有的治疗手段中，病毒载体被广泛应用于肿瘤治疗。肿瘤细胞具有高度的增殖活性和危害性，病毒载体可在肿瘤细胞内进行复制、表达和扩散，促进肿瘤细胞的凋亡和抑制肿瘤细胞的生长。因此，构建基于病毒载体介导的EIA表达系统，可在理论上为肿瘤治疗提供一种新的选择。本研究旨在构建EIA突变体腺病毒载体，并研究其对肿瘤细胞生长的影响，为肿瘤治疗提供新的治疗思路和策略。

研究内容：

1.构建EIA突变体腺病毒载体

针对病毒载体穿透力的要求，本研究将采用腺病毒作为致病载体。通过分子克隆技术，构建EIA突变体腺病毒载体，并进行鉴定。

2.病毒载体在肿瘤细胞内的表达

将EIA突变体腺病毒载体感染不同类型的肿瘤细胞，并检测病毒载体在肿瘤细胞内的表达情况。

3.病毒载体对肿瘤细胞生长的影响

通过MTT法检测病毒载体感染后肿瘤细胞的增殖活性，借此评价病毒载体对肿瘤细胞生长的抑制作用。

研究方法：

1.构建EIA突变体腺病毒载体：将人EIA基因进行点突变并克隆，将突变体EIA基因插入腺病毒质粒载体中，通过三脆磷酸钙法转染293细胞，最终得到EIA突变体腺病毒载体。

2.病毒载体在肿瘤细胞内的表达：将不同类型的肿瘤细胞分别感染EIA突变体腺病毒载体，经过一定时间后采用Westernblot和PCR等方法检测病毒载体在肿瘤细胞内的表达情况。

3.病毒载体对肿瘤细胞生长的影响：将肿瘤细胞感染EIA突变体腺病毒载体，采用MTT法检测肿瘤细胞的增殖活性及细胞数目的变化情况。

研究预期结果：

本研究将构建基于EIA突变体腺病毒载体的表达系统，在不同类型的肿瘤细胞中进行表达，并研究其对肿瘤细胞生长的影响。预计结果将有助于探明EIA在肿瘤细胞中的作用机制，验证EIA突变体腺病毒载体作为一种新型肿瘤治疗手段的可行性，并为进一步开展该领域的研究提供理论基础和实验支撑。