琼脂糖凝胶电泳-原理-步骤-详细.ppt

李莉琼脂糖凝胶电泳

AgaroseGelElectrophoresis

上海交通大学医学院讲课内容概述1琼脂糖凝胶的特点2琼脂糖凝胶电泳的应用3影响迁移率的因素4琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白5

上海交通大学医学院概述

IntroductionGelElectrophoresis：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。特点〔characteristic〕：1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动2.电泳操作方法简便，电泳速度快3.分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰4.适用于生化，免疫等定性定量测定

上海交通大学医学院琼脂糖凝胶〔AgaroseGel〕天然琼脂〔agar〕:又名琼胶、菜燕、冻粉从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。琼脂糖〔agarose〕琼脂果胶〔agaropectin〕AcidsulfateCarboxylicacidgroups

上海交通大学医学院D-半乳糖3，6-脱水-L-半乳糖琼脂糖〔Agarose〕半乳糖及其衍生物构成的中性物质

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上海交通大学医学院琼脂糖凝胶的特点

〔一〕优点〔advantage)1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来别离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质4.透明度较好，可直接或枯燥成薄膜后进行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定6.有热可逆性

上海交通大学医学院〔二〕缺点(disadvantage)1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色4.与PAGE相比，分子筛(molecularsieve)作用小，区带少

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上海交通大学医学院琼脂糖凝胶电泳的应用

ApplicationsofAgaroseGelElectrophoresis

1.适用于大分子的核酸、核蛋白等的别离、鉴定及纯化2.临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的别离与检测3.为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标?

上海交通大学医学院ThegelwithUVillumination,theethidiumbromidestainedDNAglowsorange

上海交通大学医学院Digitalimageof3plasmidrestrictiondigestsrunona1%w/vagarosegel,3Volts/cm,stainedwithethidiumbromide.TheDNAsizemarkerisacommercial1?kbpladder.ThepositionofthewellsanddirectionofDNAmigrationisnoted.

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上海交通大学医学院影响迁移率的因素

FactorsaffectingmigrationthesizeofthemoleculeconformationofthemoleculetheagaroseconcentrationofagelVoltage

上海交通大学医学院Percentagaroseandresolutionlimits

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上海交通大学医学院琼脂糖凝胶电泳别离血浆脂蛋白原理〔Principle〕血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状别离成不同区带。

上海交通大学医学院(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的组成