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第62页，讲稿共87页，2023年5月2日，星期三（二）非酶标记抗体染色法由于酶标抗体法中酶与抗体之间的共价键结合能损害部分抗体和酶的活性，抗血清中的非特异性抗体被酶标记后，与组织结合可导致背景染色等。1969年Masson建立了非酶标桥抗体法（bridgeantibodymethod），1970年Sternberger创建了辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法（peroxidaseanti-peroxidasemethod，PAP）。第63页，讲稿共87页，2023年5月2日，星期三1．桥抗体法首先制备高效价的特异性抗酶（HRP）抗体（三抗），然后利用二抗作为“桥梁”，将抗酶抗体连接在与组织待测抗原结合的一抗上，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色后显示抗原的存在。具有二次放大作用，比间接法更为敏感，但操作步骤复杂。制备三抗和二抗的动物必须与一抗为同一种动物，以保证其相互结合。二抗的一个Fab片断与一抗的Fc段结合，另一个Fab片断与三抗的Fc段结合，二抗作为连接一抗和三抗的“桥梁”，故称为桥抗体。当三抗与二抗结合后，再加HRP，此时HRP即可与三抗自然结合，从而形成一个复杂的抗原-一抗-二抗-三抗-HRP复合物而显色第64页，讲稿共87页，2023年5月2日，星期三第30页，讲稿共87