丙泊酚调整抑郁大鼠电休克治疗效应及减轻其学习记忆损害的突触可塑性机制.docVIP

丙泊酚调整抑郁大鼠电休克治疗效应及减轻其学习记忆损害的突触可塑性机制

目的对比观测丙泊酚联合电休克治疗(Electroconvulsivetherapy,ECT)中多因素(病因、ECT参数及用药)对抑郁大鼠行为、学习记忆及海马脑源性神经营养因子(Brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)表达的影响及其可能交互作用,并进一步研究丙泊酚联合ECT对海马长时程增强(Longtermpotentiation,LTP)及相关突触蛋白、基因表达的影响,以期探讨丙泊酚对抑郁大鼠ECT治疗效应的调整及减轻其学习记忆损害的突触可塑性机制。方法第一部分:健康成年雄性Wistar大鼠88只,鼠龄2～3月,体重200～250g。

除随机选取正常对照组大鼠(C组,n=8)正常饲养相同时间外,其余大鼠采用慢性轻度不可预见性应激(Chronicunpredictablemildstresses,CUMS)方法建立抑郁模型。模型制备成功后,抑郁模型大鼠按(2×5)两因素析因设计进行随机分组、被施予ECT处理,一因素为用药情况(联合生理盐水或丙泊酚,2个水平),另一因素为ECT电量(0、60、120、180、240mC,5个水平),分为两个大组:施以联合生理盐水(9ml/kg)腹腔注射(Intraperitonealinjection,I.P.)ECT处理组记为E组,施以联合丙泊酚(9ml/kg,I.P.,浓度10mg/ml)ECT处理组记为M组;再各自按ECT的5个电量水平分为5个亚组,分别记为E0、E60、E120、E180、E240与M0、M60、M120、M180、M24(0注:0mC组安装电极但不通电流,即被施予伪ECT处理()n=8)。

ECT参数设置及疗程:双相矩形波,波幅0.8A,波宽1.5ms,125脉冲/s,时程0.4、0.8、1.2、1.6s分别产生电量为60、120、180、240mC的电刺激,1次/d,连续7d。C组予以生理盐水(9ml/kg,I.P.)后行伪ECT处理。

于建模后第1d、ECT全程完成后第1d行糖水偏好实验(SPT),于建模后第2d、ECT全程完成后第2d行旷场实验(OFT),于建模后第3d、ECT全程完成后第3d行Morris水迷宫实验。第二次水迷宫实验完成后第1d,处死大鼠,取海马组织以酶联免疫吸附测定法(Enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)测定其BDNF蛋白表达。

第二部分:健康成年雄性Wistar大鼠45只、成年雄性WistarKyoto(WKY)大鼠36只,鼠龄2～3月,体重200～250g。除正常对照组(C组,随机选取Wistar鼠,n=9)正常饲养相同时间外,其余Wistar大鼠采用CUMS方法建立环境性抑郁模型,WKY鼠(作为遗传性抑郁模型)正常饲养相同时间。

模型制备成功后,抑郁模型大鼠按(2×2×2)三因素析因设计随机分为8组(n=9),一因素为抑郁模型(CUMS处理Wistar鼠或WKY鼠,2个水平),第二因素为ECT处理(或伪ECT处理,2个水平),另一因素为用药情况(联合生理盐水或丙泊酚,2个水平)。上述8组分别为:抑郁对照组(环境性抑郁模型组CD组、Wistar鼠,遗传性抑郁模型组KD组、WKY鼠)、单纯丙泊酚处理组(环境性抑郁模型组CP组、Wistar鼠,遗传性抑郁模型组KP组、WKY鼠)、单纯ECT组(环境性抑郁模型组CE组、Wistar鼠,遗传性抑郁模型组KE组、WKY鼠)、丙泊酚联合ECT组(环境性抑郁模型组CM组、Wistar鼠,遗传性抑郁模型组KM组、WKY鼠)。

按分组行ECT处理(双相矩形波、波幅0.8A、波宽1.5ms、125脉冲/s、时程0.8s、电量120mC,1次/d,连续7d):CE、KE组予以生理盐水(9ml/kg,I.P.)后行ECT;CM、KM组予以丙泊酚(9ml/kg,I.P.,浓度10mg/ml)后行ECT;C组、CD组、KD组予以生理盐水(9ml/kg,I.P.)后行伪ECT处理,1次/d,连续7d;CP、KP组予以丙泊酚(9ml/kg,I.P.,浓度10mg/ml)后行伪ECT处理,1次/d,连续7d。于建模后第1d、ECT全程完成后第1d行SPT,于建模后第2d、ECT全程完成后第2d行OFT,于建模后第3d、ECT全程完成后第3d行Morris水迷宫实验。

第二次水迷宫实验完成后第1d,处死大鼠,取海马组织。各组随机选取4只大鼠以尼氏染色观测海马CA1区、DG区神经元形态数量;各组其余5只大鼠以ELISA法测定其海马BDNF蛋白表达。

第三部分:健康成年雄性Wistar大