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流式细胞仪实验报告

篇一：流式细胞术实验报告

流式细胞术

实验目的

掌握流式细胞仪的工作原理

掌握用流式细胞仪测量细胞群体DnA含量分布的方法

了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用

实验原理

流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、Dn(:流式细胞仪实验报告)A、RnA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。

细胞内的DnA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如g0/g1期的DnA含量为2c，而g2期的DnA含量是4c。利用pI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DnA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。

仪器、材料与试剂

仪器：流式细胞仪、离心机。

材料：hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、eppendorf管。试剂：70％乙醇（保存于4℃），Rnase（-20℃保存），pI染液（避光保存于-20℃），pbs(ph7.4，保存于4℃)

实验步骤

样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。

2000rpm15min收集固定细胞，pbs洗2次。

用100μLpbs重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。

加pI染液50μL和Rnase约2μL室温放置15min。

上机检测。

样品测定并使用modFitLT软件分析结果。

实验结果与讨论:

所测样品中各周期时相的百分比：

g1期68.48%

g2/m期16.63%

s期14.89%

g2：g1=1:1.77

cV12.16提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。

流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。用以分析细胞大小、细胞周期、DnA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。这种技术具有以下特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（Fcm综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。本次实验是通过流式细胞仪对细胞内DnA的相对含量进行测定，分析hela细胞样本中各细胞周期时相所占的百分比。实验中所使用的hela

细胞应为对数生长期的细胞，因为这一期的细胞分裂活动最为旺盛，各个周期的细胞均有存在。

篇二：外周血林白细胞流式细胞技术实验报告

蚌埠医学院免疫学教研室《流式细胞技术》

流式实验数据分析练习－报告

姓名

赵灯法学号11010910051专业生物科学系年级

一．实验目的

（1）.掌握流式细胞仪的工作原理。

（2）掌握用流式细胞仪测量外周血淋巴细胞的方法。（3）了解流式细胞术在细胞生物学中的应用。

二．实验原理

1、流式细胞仪系统流程：

标本→激光系统→流动系统→信号处理系统→放大系统→计算机系统→结果打印2、基本原理：

待测标本制备成单细胞悬液通过荧光染色后进入充满鞘液的流动室，鞘液压力与样品流压力是不同的，当二者的压力差异达到一定程度时，鞘液裹挟着样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。如果我们将细胞中感兴趣的部分特异性的标上荧光染料，那麽这些染料将在细胞通过激光检测区时受激光发出特定波长的荧光,通过一定波长选择通透性的滤色片,我们可将不同波长的散射光、荧光信号区分开来，并送到不同的光电倍增管中，经过一系列的信号转换、放大，数字化处理，我们就可以在计算机直观的统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。选择不同的单克隆克隆抗体及荧光染料，我们可以利用Fc同时测定一个细胞上的多种不同特征；如果对具有某种特征的细胞有兴趣，我们还可以利用流式的分选功能将其分选出来，以便进一步培养、研究。

三．实验步骤

1.取1mL外周抗凝血。

2.标记流式管①—③号，每管加血30μL（空白管加40μL）3.各管按表一加荧光抗体，混匀后避光作用30min。

4.溶血，每管加融雪剂1mL，RT作用10min，1500rpm*5min，弃上清。5.洗涤，每管加洗涤液1mL，混匀，1500*5min，弃上清。6.固定，每管加固定剂1%pFA300μL，混匀后上机检测。

四．实验结果及数据分析

1.按流式细胞仪工作方法操作分析得到数据结果：

①空白对照

②同型对照

③第一荧光补偿

④第二荧光补