荧光光度法—核黄素药片含量测定.doc

荧光分析法测定维生素B2药片含量

一实验目的

掌握荧光分析法测定维生素B2含量的原理及方法。

熟悉荧光分光光度计的结构和使用方法。

二基本原理

维生素B2（即核黄素）的溶液在430~440nm蓝光照射下，会发黄绿色荧光，荧光峰值波长为535nm。在pH6~7的溶液中荧光最强，在pH11时荧光消失。醋酸溶液中荧光强度将会增强。其它条件一定时，维生素B2的稀溶液（0.5~5μg/ml）的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。

本实验采用标准曲线法。利用维生素B2可被还原剂（连二亚硫酸钠）还原为非荧光性物质，通过测定加还原剂前后样品液的荧光强度，来消除可能的样品基体干扰，基于上述原理来测定药片的维生素B2含量。

三仪器与试剂

仪器

荧光分光光度计，样品池（石英），10ml刻度吸管，10ml具塞比色管

试剂

维生素B2贮备液（100μg/ml）

避光操作，精确称取100mg维生素B2(生物试剂，避光干燥保存)置于250ml烧杯中加冰醋酸10ml及蒸馏水90ml在水浴上加热溶解后，放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中放暗处保存。

维生素B2标准应用液（1.0μg/ml）

实验当天用移液管准确吸取标准贮备液5.0ml于500ml棕色容量瓶中，用1%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。

1%醋酸溶液

取1ml冰醋酸用去离子水稀释至100ml。

连二亚硫酸钠（AR，保险粉）