尿液蛋白质检验一-PPT.pptVIP

二、蛋白尿形成的原因和机制蛋白尿种类病变部位尿液蛋白质特点肾小球性蛋白尿肾小球中分子量蛋白、大分子量蛋白质增加肾小管性蛋白尿肾小管小分子量蛋白质增加为主混合性蛋白尿肾小球、肾小管肾小球、肾小管受损程度不同而有一定的差异溢出性蛋白尿肾前性小分子量蛋白质组织性蛋白尿肾小管、泌尿组织T-H蛋白质增加为主三、尿液蛋白质的检验尿液中有无蛋白质？尿液中蛋白质的量？尿液中有哪一类蛋白质？三、尿液蛋白质的检验蛋白质理化性质蛋白质的两性电离和等电点蛋白质的变性蛋白质的沉淀蛋白质的呈色反应尿液蛋白质定性加热乙酸法磺基水杨酸法干化学试带法三、尿液蛋白质的检验三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：加热乙酸法蛋白质加热蛋白质变性蛋白质沉淀稀乙酸三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：加热乙酸法方法经典而准确，为蛋白定性确证实验；特异性强，干扰因素少；灵敏度较低，为150mg/L；pH值、盐离子浓度对实验结果的影响。三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法蛋白质酸性条件氨基酸阳离子蛋白盐沉淀磺酸根离子三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法操作简便、反应灵敏、结果显示快；检测灵敏度高，为50mg/L；造影剂、青霉素钾盐等可以造成假阳性。三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：干化学试带法蛋白质酸碱指示剂复合物+酸碱指示剂电离发生颜色改变尼龙膜层：防止大分子物质对反应污染。碘酸盐层：破坏维生素C等干扰物质。试剂层：与尿中所检测化学物质发生反应。支持层：塑料片，起支持作用。试带组成尿液蛋白质的检验尿干化学分析仪工作原理示意图机械系统光学系统电路系统三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性：干化学试带法操作简便、快速、易于标准化；对球蛋白、本周蛋白的敏感度低；不同类型试带灵敏度有一定的区别，在70～100mg/L。三、尿液蛋白质的检验?如何选择这些定性方法？尿液蛋白质定性三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性实验方法操作性灵敏度实验干扰因素加热乙酸法较复杂150mg?L-1尿液中盐浓度磺基水杨酸法简便50mg?L-1药物及造影剂干化学试带法简便100mg?L-1对球蛋白不敏感三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定性采用干化学法或磺基水杨酸法进行尿蛋白初查。加热乙酸法作为尿蛋白定性确证实验。当不同定性实验方法结果不一致时如何处理？三、尿液蛋白质的检验1.尿液中存在的蛋白质为球蛋白。加强与临床医师的沟通非常必要！磺基水杨酸法阳性，干化学试带法为阴性2.蛋白质含量介于两种方法灵敏度之间。3.尿液中含有青霉素或者造影剂等物质。三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定量双缩脲法比浊法染料结合法需要对尿液标本进行浓缩处理！方法原理双缩脲法蛋白质与碱性铜溶液作用，形成紫色缩合物。比浊法酸性条件下，生物碱类试剂与蛋白质结合沉淀。染料结合法染料与蛋白质结合后最大吸收峰发生漂移。三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定量三、尿液蛋白质的检验?如何选择这些定量方法？方法方法优缺点双缩脲法蛋白质测定经典方法，但灵敏度较低比浊法操作简便，线性范围窄，影响因素多染料结合法显色稳定，容易对比色器皿造成污染尿液蛋白质定量三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质定量1.根据实验室条件选择合适的定量方法。2.卫生部临检中心推荐双缩脲法和丽春红S法。3.加强尿液蛋白质定量的质量控制非常必要！尿液蛋白质分类SDS凝胶电泳双向凝胶电泳??????三、尿液蛋白质的检验三、尿液蛋白质的检验尿液蛋白质分类：SDS凝胶电泳SDS与蛋白质结合，消除了蛋白质分子中的电荷差异，再通过聚丙烯酰胺的分子筛作用，将蛋白质按分子量大小相互分离。三、尿液蛋白质的检验尿液标本葡聚糖、PEG等SDS凝胶电泳染色、光密度扫描**改？怎么改？*改？怎么改？*改？怎么改？*生理性蛋白尿*生理性蛋白尿1.蛋白质的胶体性质蛋白质分子量颇大，介于一万到百万之间，故其分子的大小已达到胶粒1～100nm范围之内。球状蛋白质的表面多亲水基团，具有强烈地吸引水分子作用，使蛋白质分子表面常为多层水分子所包围，称水化膜，从而阻止蛋白质颗粒的相互聚集。与低分子物质比较，蛋白质分子扩散速度慢，不易透过半透膜，粘度大，在分离提纯蛋白质过程中，我们可利用蛋白质的这一性质，将混有小分子杂质的蛋白质溶液放于半透膜制