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斑马鱼een基因在早期造血发育中的功能研究的开题报告

一、研究背景与意义

造血系统是体内最终成熟的细胞来源，起始于胚胎时期，经过一系列精密的发育过程，最终形成不同种类的血细胞。在此过程中，基因调控起着关键的作用。近年来，研究表明，在造血系统中，基因表观遗传学调控更是不可或缺的一环。而其中启动子二甲基化调控是一种广泛出现于哺乳动物、鸟类和爬行动物等高等生物中重要的基因调控机制。

在斑马鱼发育的初期，来自前体细胞在胚胎时期定居在脊索运行轨迹的两侧，并作为脊索基质细胞（NSM）发育成血细胞体系。NSM作为一种迁移血细胞生产细胞放在脊索的感受器节点之中，贡献于斑马鱼的全系造血成为了目前在鱼类造血系统的研究中的热点之一。een基因是一种新发现的基因，最早在一种罕见的癌症病人中发现。een基因在哺乳动物中的作用还不是很清楚，但是在斑马鱼中的已知功能是调控转录因子myod1在神经肌肉系统体系发育中的转录活性。因此推测，在斑马鱼中een基因在早期造血发育中起到了关键的作用，但具体功能仍未知晓。研究een基因在斑马鱼早期造血发育发挥的具体作用，有助于深入理解基因调控机制，探索造血发育的分子调控机理，同时为研究其他物种的早期造血发育和人类疾病治疗提供新的思路和基础。

二、研究目的

本研究旨在探索een基因在斑马鱼早期造血发育中的作用，并研究活化或抑制een基因对斑马鱼早期造血发育的影响，旨在为进一步理解基因调控机制、探讨造血发育的分子调控机理提供新思路。

三、研究内容

1.构建实验物种饲养系统。选取斑马鱼为研究对象，建立起一套稳定的饲养机制，掌握斑马鱼早期生长和发育的规律。

2.构建Een-gRNA载体与Een基因突变鱼株。设计Een-gRNA切割靶标，构建Een-gRNA载体。利用CRISPR/Cas9技术将Een-gRNA载体导入斑马鱼到达NSM发育过程中，探究其在斑马鱼未来NSM发育过程中的变化。

3.样品采集与分析。提取NSM细胞RNA，利用qPCR或RNA-seq技术检测Een基因的表达量的变化，研究Een基因是否会影响主导早期造血细胞生长的相关转录因子、生长肌球蛋白的表达。

4.分析分子机理。获得Een基因的突变鱼株，分析基因突变对Een基因的表达以及早期造血细胞生长与分化的影响，进一步研究een基因在斑马鱼早期造血发育调控中的具体作用。

四、研究方案与预期

本研究工作主要包括实验物种的饲养，搭建CRISPR/Cas9技术下的Een基因编辑系统并构建转基因鱼株，采用RNA-seq技术进行表达谱分析，进一步研究een基因在斑马鱼早期造血发育中的具体作用。预计使用半年时间完成以上实验工作，并取得初步研究结果。预期结果为发现een基因在斑马鱼早期造血发育中发挥重要的调控作用，同时对该基因在其它物种造血发育中的作用发现奠定基础。