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EDTA改性壳聚糖的制备及表征

收分光光度计（赛默飞世尔科技公司〉；NEXUS-670红外光谙仪（美国Nicolet公司）。

213原子吸牧分光光度计的工作条件

元素：Cd:波长．228.31l1ll，火焰类型．Ai1-·C丑，灯电流．81nA:狭缝．o．5mn,

负腐压：292．燃烧器高度．7.0llllll;燃气流晕：12L/lll11lo

2.2实验方法

2.2.1壳娶糙衍生物的制备

称取0.5g壳聚糖加入到50nil.0.1%(v/v)腊酸溶液中，搅拌至完全浴胖。加入计掷蜇的EDTA-2Na(EDTA与壳聚糖质揽比为2:1)，并用5lllO1/LNaOH调浴液pH值至

5.0。随后加入EDAC·HCI,混合物室温搅拌反应4h,反应液透析，冷冻干燥即成成品，4·c保存备用[69]。

2.2.2ETC吸附率的测定

分别昼取50mL浓度约为2001ng/L的cc21、+溶液置千一系列锥形瓶中。用1%的HN03和1mol/LNaOH溶液谈lpH值至5.0,分别加入6nJLl％的壳聚糖衍生物，然后定容至100ll止室温振荡数小时，振勃速度为100r/min。超滤，取清液用火焰惊子分光光度法进行浏定。同时做空白实验。使川公式2-1计算吸附率·

。吸附率{% =C。-C x100

。

C (2-1)

式中：C。、C1—分别代表Cd气岛子液吸附前后的浓度，nig/L.

2.2.3ETC取代度的测定

2.2.3.1壳聚糖标准溶液的制备及标准曲线的绘制

准确称取50n屯壳聚糖倒入烧杯中，向其中加入20n正0.5n10VL的醋酸，待壳聚糖完全溶解后再用0.5molfL的醋酸溶液定容至100niL，此时壳聚糖浓度为0.5gfL。准确移取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8uiL亢聚糖标准溶液，分别加入到10niL比色管中，依次加入2molfLpH值为5.5的醋酸钠缓冲液、1％苟三酮试剂（和

三酮1g用乙二醇年卧定容至100n11,避光保存）各1.0II止，加水补至3.0n止。混合均匀后，千沸水浴加热10II血，取出迅速冷却至室温后，加入60％的乙醇溶液稀释至10nJL,摇匀后，静盟20min,以蒸熘水为参比洌定570lllll处的吸光度[75]。井以壳聚糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.3.2ETC取代度的割定

在1011止比色管中分别依次加入待测杆品0.2mL、211101/LpH值为5.5的醋酸钠缓冲液、1％印三酮溶液各10mL，补充水全3,nl混合均匀。千沸水浴加热1011血，迅速冷却至室温，加入60％的乙醇溶液稀释至1011让，摇匀／静置20n血，以蒸缩水为参比淜定570lllll处的吸光度。根据所测吸光度及标准曲线，计绊出检测的先聚糖

及待测样品中壳聚糖含盘，并根据式2-2计算产物取代度。

A=(C1t女）／C党 (2-2)

式中，A一取代度；C火一壳聚糖浓度，g/L:Cx一杆品中壳聚糖浓度，gfL。

2.2.4衍生物制备条件的单因索实验

2.2.4.1EDTA-2Na添加噩的影响

称取0.5g壳聚糖加入到501nLO.l%(v/v)醋酸浴液中，搅拌主完全浴角礼分别加入计算盘的EDTA-2Na(EDTA:CTS=l:l、2:1、4:1、6:1、8:1、10:1、12:1)，调pH值至5.0。添加EDAC·HCI使其最终浓度为10nunol/L,反应浪合物室温搅拌4h,反应液透析，冷冻干操为成品，分别测定个同EDTA-2Na添加登下所制ETC取代度及其对C护的吸附率。

2.2.4.2pH值的影响试验

0.5g壳聚糖加入到50niL0.1%(v/v)醋酸溶液中，找t半加入与壳聚糖匝量比为2:1的EDTA-2Na,调pH值至3.0、4.0、5.0、6.0,其他同2.2.4.1,分别测定不同pH值下所制ETC取代度及其对C护的吸附率。

2.2.4.3EDAC·HCI浓度的影响试验

0.5g壳聚糖加入到50niL0.1%(v/v)醋酸溶液中，找拌。加入与壳聚糖质翟比为2:1的EDTA-2Na