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荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)细胞培养

取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。药物处理

(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。

EdU标记

用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μMEdU培养基；

注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(2h)宜采用高浓度(10~50μM)，长时间孵育(24h)宜采用低浓度(1~10μM)；

如果需配置10μMEdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；

96孔板*48孔板24孔板12

96孔板*

48孔板

24孔板

12孔板

6孔板

5.5cm小皿

EdU培养

基染色反应

液

100μl

150μl

200μl

300μl

500μl

2mL

100μl

150μl

200μl

300μl

500μl

2mL

注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；

悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。

每孔加入100μL50μMEdU培养基孵育2小时，弃培养基；

注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；

2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；

PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。

注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。

3T3人成纤维细Hela人宫颈癌细HEK293*

3T3

人成纤维细

Hela

人宫颈癌细

HEK293*

细胞系

人胚胎细胞

酵母细胞

人胚肾细胞系

人神经细胞

胞

胞

细胞周期

~30min

~3h

~18h

~21h

～25h

~5d

孵育时间

5min

20min

2h

2h

2h

1d

注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。孵育时间越长，细胞增殖数量就越多；

2)*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，具体实验的细胞群体细胞周期会有所变化。

PubMedID18272492185219181899641

PubMed

ID

1827249

2

1852191

8

1899641

1

1917937

1

1925339

6

1964774

6

1954441

7

2008070

0

2002588

9

2065970

8

2131071

3

2082449

0

2124828

4

2122792

4

2182962

1

2198043

0

Reference

Cellline

Concentration

Time

SalicA,etal.PNAS.2008

NIH3T3,Hela

10nM~10μM

1hr

CappellaP,etal.CytometryA.2008

HL-60,

U2OS

A2780,

1~10μM

30min

ChehrehasaF,etal.JNeurosciMethods.2009

LimsirichaikulS,etal.NucleicAcidsRes.

2009

Neurospheres

1~20μM

24hr

Primaryfibroblasts

10μM

1,2,4hr

WarrenM,etal.DevDyn.2009

Chickembryos

10μM~2mM

4hr

YuY,etal.JImmunolMethods.2009

Momcilovi?O,etal.StemCells.2009

Spleencells

HumanEScells

50μM

10μM

24hr

30min

CinquinO,etal.PNAS.2010

emb-30

1μM

12hr

HanW,etal.LifeSci.2009

VSMC

50μM

2hr

HuangC,etal.JGenetGenomics.2010

ESC

50μM

2hr

HuaH,etal.NucleicAcidsRes.2011

fission yeaststrains

10μM

3hr

LvL,etal.MolCellBiochem.2011

EJcells

50μM

4hr

YangS,etal.BiolReprod.2011

GCcells

50μM

2hr

ZhangY