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目录

实验一、母液的配制和保存……………2

实验二、培养基的配制与灭菌………….5

实验三、外植体消毒与初代培养的建立……………….7

实验四、继代与增殖培养………….9

实验五、生根培养…………………11

实验六、植物茎尖脱毒培养………13

实习试管苗的炼苗与移栽……..15

实验一、母液的配制和保存

一、实验目的

通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。

二、原理

配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩20倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩200倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩200倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩200倍）等。

三、实验材料、试剂和仪器设备

1．试剂

NH4NO3,KNO3,CaCl2·2H2O,MgSO4·7H2O,KH2PO4,KI,H2BO3，MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,Na2·MoO4·2H2O,CuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,Na2?EDTA?2H2O，FeSO4·7H2O，烟酸，甘氨酸,盐酸硫胺素,肌醇,盐酸吡哆醇,蒸馏水

2．仪器设备

冰箱，天平，酸度计或pH试纸，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(500ml，1000ml)，药勺、称量纸、酸度计或pH试纸，滴管、玻璃棒，电炉，微波炉

四、实验方法

1.大量元素母液的配制

配制时先用量筒量取蒸馏水大约800ml，放入1000ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3,KNO3,KH2PO4,MgSO4.7H2O,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

2.微量元素母液的配制

按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4?4H2O，ZnSO4?7H2O，H2BO3，KI，NaMoO4?2H2O，CuSO4?5H2O，CoCl2?6H2O，按制备母液Ⅰ的方法逐个溶解。（钼酸钠难溶解，可在室温下用蒸馏水溶解后再加入到微量元素母液中。）定容至1000ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

3.铁盐母液配制

把FeSO4?7H2O和Na2?EDTA?2H2O分别置于450ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2?EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5，加蒸馏水到最终容积1000ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。

4.有机化合物母液的配制

按配方表中用量依次称取：维生素B1，烟酸，甘氨酸，维生素B6，用蒸馏水依次溶解并定容后，装入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

5.植物生长物质母液的配制

NAA母液：准确称量10mg，先用少量1mol/LNaOH溶液完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，即配制成浓度为0.1mg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

6-BA母液的配制方法相似，母液浓度为2mg/ml。请注意细胞分裂素的溶解方法。

五、实验报告

按照实验报告格式要求及各组在实验中的配制溶液情况，完成报告撰写。

附：MS培养基母液配方

成分

数量(mg/L)

成分

数量(mg/L)

母液Ⅰ

母液Ⅱ

NH4NO3

33000

MnSO4?4H2O

4460

KNO3

38000

ZnSO4?7H2O

1720

KH2PO4

3400

H2BO3

1240

MgSO4?7H2O

7400

KI

166

CaCL2?2H2O

8800

Na·MoO4?2H2O

50

母液Ⅳ

CuSO4